[发明专利]一种蛋白分离纯化的方法

权利要求书

1.一种蛋白分离纯化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)制备正电荷分子筛：将不带电荷的分子筛树脂与有机溶剂混合，在变性剂和保护剂的作用下，在140-160℃下反应24-48h，制备获得复合分子筛树脂，再加入酸性溶液抽滤洗涤至中性，干燥后获得正电荷分子筛；

2)将待纯化蛋白样品经步骤1)获得的正电荷分子筛过滤，获得的滤液经尺寸排阻色谱层析对蛋白进行纯化，或者将获得的滤液经阴离子交换层析对蛋白进行纯化，获得纯化溶液；

分子筛树脂为Sephacryl S-100HR、Sephacryl S-200HR、Sephacryl S-300HR、Superdex 75Prep Grade或Superdex 200Prep Grade；

变性剂为3-氨丙基三甲氧基硅烷、N-(2-氨乙基)-3-氨丙基三甲氧基硅烷、γ-氨丙基三乙氧基硅烷中的一种或多种的混合；

待纯化蛋白样品为表达纳米抗体的细胞发酵液，步骤2)纯化的目的蛋白为纳米抗体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述有机溶剂为甲苯、三甲基苯、丙酮、甲醇、乙醇中的一种或多种的混合；所述保护剂为氮气、氦气、氖气、氩气、氪气、氙气中的一种或多种的混合。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述不带电荷的分子筛树脂、变性剂、有机溶剂三者的比例为(4～5)g:(5～6)mL:(50～60)mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的反应结束后，将反应混合液离心，得到的沉淀经洗涤后进行干燥，获得复合分子筛树脂，所述沉淀洗涤用的试剂为甲苯和甲醇的混合物。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1)所述得到的沉淀经洗涤后进行真空干燥，干燥温度为90℃-100℃，干燥时间为8h-12h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述抽滤洗涤所用的酸性溶液为盐酸、硫酸中的一种或两种的混合，浓度为1-2mol/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述阴离子交换过程中所用的平衡液为HEPES溶液，浓度为10-100mM。

8.根据权利要求1-7任意一项所述的方法，其特征在于，所述待纯化蛋白样品在进行纯化前经0.22μm滤膜过滤除菌。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞发酵液为大肠杆菌、酵母菌或中国仓鼠卵巢细胞系发酵获得的培养液。