[发明专利]一种重组G-17蛋白及其单克隆抗体的制备在审
| 申请号： | 201811384893.9 | 申请日： | 2018-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN109762058A | 公开（公告）日： | 2019-05-17 |
| 发明（设计）人： | 刘清泉;胡祥叶;朱伟;项美华;武戌青;王立童;吴琼杉;余铭恩 | 申请（专利权）人： | 杭州贤至生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/595 | 分类号： | C07K14/595;C12N15/16;C12N15/70;C12N1/21;C07K16/26;G01N33/74;G01N33/577 |
| 代理公司： | 北京天奇智新知识产权代理有限公司 11340 | 代理人： | 朱海江 |
| 地址： | 311100 浙江省杭州市余杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组蛋白 单克隆抗体 核苷酸序列 抗原表位 配对 制备 大肠杆菌偏爱密码子 蛋白氨基酸序列 筛选 单克隆细胞株 生物技术领域 原核表达系统 重组蛋白表达 氨基酸序列 标记荧光 蛋白分子 定量检测 化学合成 抗原免疫 柔性片段 细胞融合 甘氨酸 胃泌素 包被 单抗 多轮 构建 抗体 可用 微球 蛋白 重复 转换 | ||
【权利要求书】：
1.一种重组蛋白，其特征在于该重组蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID No:1所示。
2.一种核苷酸序列，其特征在于该核苷酸序列如序列表SEQ ID No:2所示，可编码权利1所述的重组蛋白。
3.一种质粒载体，其特征在于该质粒载体含有权利要求2所述的核苷酸序列。
4.一种菌株，其特征在于该菌株包含采用权利要求3所述的质粒载体。
5.权利要求1所述的重组蛋白用于G-17单克隆抗体的制备，包括：
(a)化学合成权利要求2所述的核苷酸序列，并连接质粒载体，构建重组G-17蛋白表达载体；
(b)将步骤(a)中重组G-17蛋白表达载体转化到大肠杆菌，筛选得到重组G-17蛋白表达菌株；
(c)大规模培养重组G-17蛋白表达菌株，经纯化获取重组G-17蛋白；
(d)重组G-17蛋白多次免疫Balb/c小鼠后，取其脾脏细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合，经G-17多肽多轮筛选得到单克隆细胞株；
纯化单抗通过双抗夹心法检测重组G-17蛋白，并分别标记荧光微球和包被NC膜，实验确定最佳单抗配对组合。
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