[发明专利]一种交联肽段定性定量分析方法

权利要求书

1.一种交联肽段定性定量分析方法，其特征在于：

利用同位素标记策略将交联肽段分别轻重标记后同时进入质谱分析，使轻重标记交联肽段共碎裂进入同一张二级谱，且在二级谱中，轻重标记肽段碎片离子质量不同且成对出现，利用成对的碎片离子过滤二级谱图并进行数据检索，得到交联肽段鉴定结果；利用交联肽段匹配到的成对碎片离子的数目及种类与交联肽段的长度信息，获取高可信度的交联肽段质量控制信息；提取二级谱中成对的特征碎片离子强度进行相对比较，实现交联肽段的定量分析。

2.按照权利要求1所述的交联肽段定性定量方法，其特征在于：质谱分析模式选择利用轻重标记交联肽段母离子质量差触发肽段碎裂和二级谱扫描，利用基于动态排除的数据依赖采集模式，利用基于肽段强度及电荷过滤的数据采集模式，利用非数据依赖采集模式，利用基于靶向肽段的平行反应监控采集模式或利用基于无动态排除的数据依赖采集模式中的至少一种。

3.按照权利要求1所述的交联肽段定性定量方法，其特征在于：过滤二级谱图并进行数据检索步骤为，将采集到的二级谱图按照轻重标记碎片离子质量差进行过滤，当带有相应质量差的碎片离子成对出现时，则保留，将不成对的信号去除，实现二级谱图过滤；将过滤后的谱图只保留轻标或者重标中的一种，进行交联肽段蛋白质组数据检索，得到交联肽段鉴定结果。

4.按照权利要求1所述的交联肽段定性定量方法，其特征在于：涉及到的同位素标记策略使得轻重标记后的交联肽段能够共碎裂进入同一张二级谱，即交联肽段一级谱质荷比差别为0-25m/z，且在二级谱中，轻重标记肽段碎片离子质量不同，并能够成对出现；

标记策略包括：二甲基化标记、¹⁸O标记、SILAC标记、胍基化标记、ICAT标记中的两种或三种以上标记方法的组合。

5.按照权利要求1所述的交联肽段定性定量方法，其特征在于：获取高可信度的交联肽段质量控制信息的步骤为，将鉴定到的交联肽段根据匹配到的a, b, y, z, c, x成对碎片离子的数目及包含交联剂的碎片离子的种类进行打分，并除以交联肽段的长度信息，构成交联肽段的质量控制方法；对所有谱图进行计算后获得高可信度的交联肽段信息。

6.按照权利要求1所述的交联肽段定性定量方法，其特征在于：定量方法中比较的特征碎片离子强度包括全部碎片离子的强度加和、a1+离子强度、y1+离子强度、b1+离子强度、跨交联剂碎片离子强度中的一种及两种以上。

7.按照权利要求1所述的交联肽段定性定量方法，其特征在于：分析的交联肽段适合于经过质谱不可断裂型交联剂，包括双琥珀酰亚胺辛二酸酯、双琥珀酰亚胺戊二酸酯、二(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯和二(磺基琥珀 酸亚酰胺)戊二酸酯或质谱可断裂型交联剂，包括赖氨酸特异性可富集型交联剂、蛋白相互作用受体、叠氮型交联剂、光断裂交联剂、二甲基乙炔苯、二琥珀酰亚胺亚砜。

8.按照权利要求1所述的交联肽段定性定量方法，其特征在于：交联肽段的共碎裂使用的质谱碎裂方式包括碰撞诱导解离、高能碰撞诱导解离、电子转移离解、紫外诱导解离、EThcD、ETciD中的一种及二种以上。

9.按照权利要求1、4或6所述的交联肽段定性定量方法，其特征在于：随着标记同位素的引入，定量方法适用于包括两重、三重、四重、五重、六重、七重或八重待测交联肽段样品的同时相对定量分析，或适用于加入标准肽段的多样品绝对定量分析。

10.按照权利要求1所述的交联肽段定性定量方法，其特征在于：所述的质谱分析系统中的质谱仪包括静电场轨道阱、飞行时间管、三重四级杆或傅立叶变换离子回旋共振质量分析器。