[发明专利]一种交联肽段定性定量分析方法有效

专利信息
申请号: 201811389994.5 申请日: 2018-11-21
公开(公告)号: CN111208299B 公开(公告)日: 2021-05-28
发明(设计)人: 张丽华;刘健慧;单亦初;赵群;杨开广;张玉奎 申请(专利权)人: 中国科学院大连化学物理研究所
主分类号: G01N33/68 分类号: G01N33/68;G01N27/62
代理公司: 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 代理人: 马驰
地址: 116023 辽宁省*** 国省代码: 辽宁;21
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摘要:
搜索关键词: 一种 交联 定性 定量分析 方法
【说明书】:

发明涉及一种交联肽段的定性定量分析方法。其方法利用标记后碎片离子的成对出现特性,实现包括蛋白质的交联、酶解及标记、液质联用分析、谱图预处理、数据检索、质量控制及定量分析。本发明鉴定准确度高,降低数据检索及质量控制计算量,定量准确度高、精密度好,动态范围宽。对单一蛋白、单一蛋白质复合体及大规模蛋白质复合体的动态组成及结构研究具有显著优势。

技术领域

本发明涉及一种交联肽段的定性定量分析方法,包括交联肽段标记、质谱分析、谱图预处理、肽段鉴定、质量控制及定量分析。该发明具有鉴定准确度高,降低数据检索及质量控制计算量,定量准确度高、精密度好,动态范围宽等优点。对单一蛋白、单一蛋白质复合体及大规模蛋白质复合体的动态组成及结构研究具有显著优势。

背景技术

蛋白质及其复合体结构的详细解析是理解其性质和功能的重要组成部分,在生物过程中具有重要意义。目前获得蛋白质结构信息的主要方法包括X射线晶体衍射、核磁共振技术(NMR)、冷冻电镜、交联质谱等。交联质谱作为近些年发展起来的新技术,可以有效的获得蛋白相互作用的界面信息,并可以实现原位交联,通过交联剂的共价作用固定相互作用力较弱的蛋白质,因此,近些年获得了广泛的关注。

然而,由于交联后肽段的结构较传统蛋白质组所得肽段复杂很多,因此对其定性定量方法提出了更高的要求。对于交联肽段的鉴定,目前的方法大多沿用了传统蛋白质组学的目标-诱饵策略,即将靶蛋白数据库反转或改组以产生的诱饵序列,与靶蛋白数据库合并作为数据检索的总数据库。利用总数据库对产生的质谱谱图进行数据检索及可靠性评价,再根据结果中匹配到的诱饵库谱图数和目标库谱图数计算假发现率(False DiscoveryRate,FDR),进而通过FDR的阈值得到可信度较高的鉴定结果。但对于交联肽,每张谱图对应着两条肽段的综合匹配,每条肽段都有匹配到诱饵肽的可能,因此需要考虑目标-目标,诱饵-诱饵,目标-诱饵这三种可能(Nat.Methods.2012,9,901.),给计算增加了难度;并且大量的诱饵库的加入增加了误匹配的可能和计算的数据量。

对于交联肽的定量,目前的方法主要涉及基于一级谱的利用重和轻标记的同位素标记交联剂或相互作用的蛋白(如传统的基于SILAC的方法)方法、基于一级谱的无标记定量方法和基于二级谱报告离子的定量方法。目前的交联蛋白质定量软件仅包括XiQ(JProteomics.2013,88,120.)和xTract(Nat Methods.2015,12,1185)。但该方法定量准确度易受到共洗脱的非交联肽段干扰,准确度仍有待提高。

发明内容

本发明针对交联肽段的特有性质及现有方法的不足,发展了一种交联肽段定性定量分析方法,包括交联肽段的标记思路的改变、质谱采集方法的配合、新型谱图预处理、肽段鉴定、质量控制方法及相应定量分析方法。以此提高交联肽段鉴定的可信度和定量的准确度。

为了实现上述目的,本发明采用的技术方案为:

一种交联肽段定性定量分析方法,利用同位素标记策略将交联肽段分别轻重标记后同时进入质谱分析,使轻重标记交联肽段共碎裂进入同一张二级谱,且在二级谱中,轻重标记肽段碎片离子质量不同且成对出现,利用成对的碎片离子过滤二级谱图并进行数据检索,得到交联肽段鉴定结果;利用交联肽段匹配到的成对碎片离子的数目及种类与交联肽段的长度信息,获取高可信度的交联肽段质量控制信息;提取二级谱中成对的特征碎片离子强度进行相对比较,实现交联肽段的定量分析。

质谱分析模式选择利用轻重标记交联肽段母离子质量差触发肽段碎裂和二级谱扫描,利用基于动态排除的数据依赖采集模式,利用基于肽段强度及电荷过滤的数据采集模式,利用非数据依赖采集模式,利用基于靶向肽段的平行反应监控采集模式或利用基于无动态排除的数据依赖采集模式中的至少一种。

过滤二级谱图并进行数据检索步骤为,将采集到的二级谱图按照轻重标记碎片离子质量差进行过滤,当带有相应质量差的碎片离子成对出现时,则保留,将不成对的信号去除,实现二级谱图过滤;将过滤后的谱图只保留轻标或者重标中的一种,进行交联肽段蛋白质组数据检索,得到交联肽段鉴定结果。

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