[发明专利]基于肽段C末端化学衍生提高质谱碎裂效率和响应的方法

权利要求书

1.基于肽段 C 末端化学衍生提高质谱碎裂效率和响应的方法，其特征在于：

首先在含有机相的溶剂中，将肽段 C 末端的羧基与侧链谷氨酸或天冬氨酸的羧基进行酰胺化反应或者酯化反应；接着利用肽段酰胺酶特异性水解并暴露肽段C末端的羧基；最后在含有机相的溶剂中，将暴露的 C末端羧基进行碱性分子的化学衍生，进行质谱检测；

所述的酰胺化反应是指肽段 C 末端的羧基与侧链谷氨酸或天冬氨酸的羧基与甲胺、乙胺、丙胺、乙醇胺中的一种或两种以上反应生成酰胺类物质；所述的酯化反应是指肽段 C末端的羧基，或肽段 C 末端的羧基与侧链谷氨酸或天冬氨酸的羧基与甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或两种以上反应生成酯类物质。

2.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于：所述的含有机相的溶剂是水和有机相的混合物，溶剂中水的体积浓度 2-30%；有机相为乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、丙酮、异丙醇中的一种或两种以上。

3.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于：所述的酰胺化反应温度为 4-50℃，反应时间为 0.5-12h；所述的酯化反应温度为 4-50℃，反应时间为 0.5-12h。

4.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于：所述的肽段酰胺酶从大肠杆菌体内提取，能够特异性催化水解肽段 C 末端的酰胺键，而对肽段侧链的酰胺键和骨架的肽键无水解作用。

5.如权利要求 1 或 4 所述的方法，其特征在于：肽段酰胺酶催化水解反应的 pH 为6.8-8.5，温度为 25-50℃，时间为 6-48h，酰胺酶与肽段的质量比为 1:50-20:1。

6.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于：所述的碱性分子是氨基胍、胍基丁胺、N,N-二甲基乙二胺、N,N-二甲基-1,3-丙二胺、(2-氨基乙基)三甲基氯化铵中的一种或两种以上。

7.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于：暴露出 C 末端羧基的肽段

与碱性分子反应时的质量体积比为 0.005-1 克每毫升，反应温度为 4-50℃，反应

时间为 0.5-12h。

8.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于：肽段 C 末端标记上的碱性分子能够增加二级质谱中 y 离子的数目，提高肽段在质谱中的碎裂效率和响应，从而提高肽段的检测灵敏度。

9.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于：肽段 C 末端化学衍生提高质谱碎裂效率和响应的方法,应用于提高多肽类药物的检测灵敏度与质谱响应信号。