[发明专利]一种抗缪勒氏管激素的定量检测方法

权利要求书

1.一种抗缪勒氏管激素的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)试剂配制：

A、AMH校准品B-F和AMH质控品Ⅰ&Ⅱ分别用纯化水溶解，并轻轻振荡充分溶解、混匀后待用；

B、洗涤液：用纯化水25倍稀释浓缩洗液；

(2)样本处理：

A、标记选择使用的微孔条，并依次加入校准品、质控品和待检样本到相应的微孔中；

B、每微孔依次加入AMH反应缓冲液、抗AMH-生物素结合物及AMH链霉亲和素-霉结合物分别进行孵育和洗板；

(3)显色反应：每微孔加入显色液，室温条件下振荡孵育8-12min；

(4)终止反应：每微孔加入终止液，轻敲板壁混合后，用酶标仪读数；

(5)结果判断：检测样本的数据使用对数-对数运算，利用立方回归分析模型进行标准曲线及方程确定，并通过曲线方程进行结果计算。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤(2)B中微孔内加入AMH反应缓冲液后的孵育过程为：每微孔加入AMH反应缓冲液，转至微孔板摇床上，室温条件下震荡孵育90min，在孵育过程的最后20-30min，准备洗涤液，待孵育完成后洗板。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤(2)B中微孔内加入抗AMH-生物素结合物后的孵育过程为：每微孔加入抗AMH-生物素结合物，转至微孔板轨道摇床上，室温条件下振荡孵育30min，洗板。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤(2)B中微孔内加入AMH链霉亲和素-霉结合物后的孵育过程为：每微孔加入AMH链霉亲和素-霉结合物，转至微孔板轨道摇床上，室温条件下振荡孵育30min，洗板。

5.根据权利要求1-4所述的检测方法，其特征在于，所述洗板的方法为：用全自动洗板机洗板时，自动洗板5次；手动洗板时，则在加入洗涤液后静置5-10s，再手动甩干重复洗板5次。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述孵育时间随目测颜色变化进行调节，整体颜色偏浅时，可适当延长显色时间。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述酶标仪读数需在10min内完成，且酶标仪读数为450nm、620/630nm双波长读数。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述对数-对数为lgA-lgNG，其中lgA为检测样本吸光度值以10为底的对数值，lgNG为样本的浓度值以10为底的对数值。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述结果计算步骤如下：

A、先在酶标仪上比色，比出校准品、质控品及样本的吸光度值，然后在酶标仪上直接选择四参数方程，即酶标仪根据读出来的吸光度值以及已知的校准品浓度，绘制出四参数曲线，从而根据样本吸光度值酶标仪直接计算出样本浓度。

B、若样本浓度超过18ng/mL，应使用校准品A/样本稀释液进行稀释后重新实验，最后结果乘以稀释倍数；

C、若浓度低于校准品B浓度的样本应如实报告。