[发明专利]一种抗缪勒氏管激素的定量检测方法

说明书

本发明公开一种抗缪勒氏管激素的定量检测方法，涉及生物检测的技术领域。本发明提供的抗缪勒氏管激素定量检测方法，是通过三步双抗体夹心法酶联免疫进行定量检测，采用生物素‑抗体与故乡抗体‑抗原复合物结合之后，再与链酶亲和素‑辣根过氧化物酶结合物结合，这样抗体‑抗原‑抗体生物素复合物‑SHRP结合在微孔上，通过酶‑底物显色反应，酶和底物反应程度由主波长为450nm，参考波长620/630nm的双波长来测定吸光度值，然后根据标准曲线方程计算待测样本的AMH的浓度。本发明提供的检测方法步骤简明，操作简单，使用方便，能准确检测AMH浓度，对检测结果进行定量分析。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种抗缪勒氏管激素的定量检测方法。

背景技术

抗缪勒氏管激素(anti-Mullerian hormone，AMH)是转化生长因子β超家族的成员之一，由Professor Alfred Jost于1974年首先发现。AMH是由两个相同的70KD亚基，通过二硫键连接组成的二聚糖蛋白，相对分子质量为140X103Da，人类AMH编码基因位于19号染色体短臂，大小2.4～2.8kb，含有5个外显子。

随着现代生活方式的改变，普遍晚婚晚育现象、不良的现代生活方式(如过度节食减肥、吸烟、饮酒、熬夜)、巨大的工作精神压力，造成不孕不育率迅速上升。因此，对男性女性生育能力的尽早评估是十分有必要的。抗缪勒氏管激素(AMH)在性腺器官发育过程中起着重要作用，是男女性腺功能的重要标记物之一。在男性中AMH主要由睾丸间质细胞产生，始于胚胎形成并贯穿生命始终；在男性胎儿的发育过程中，AMH导致苗勒氏管退化，形成正常发育的男性生殖管道。在女性中AMH主要由卵巢颗粒细胞产生，血清AMH保持相对于男性较低的一个水平，从青春期开始，血清AMH水平随时间慢慢降低，并在更年期降低。AMH是由卵巢窦前卵泡和小窦状卵泡颗粒细胞分泌的活性因子，不受促性腺激素(Gn)的反馈调节，可抑制卵泡的募集和选择，在始基卵泡上无表达，在初级卵泡的颗粒细胞上弱表达，在≤4mm的小窦卵泡中强表达，而在＞4mm窦卵泡中表达逐渐减弱至完全消失。抑制卵泡生长，参与了卵泡形成的两个重要调控，始基卵泡募集和周期募集。较其它卵巢评价指标更能准确地反映育龄期女性机体内分泌状态。人体内，AMH的平均半衰期为(27.6±0.8)h，完全清除约需8d。正常生育期女性血清AMH与年龄呈负相关，在0.43～43.19pmol/L间波动，峰值处于18～25岁，36岁后显著下降，41～47岁时降至8.0pmol/L，各个年龄段AMH的正常参考范围均较大。随着AMH的作用被越来越多人所熟知，AMH逐步被应用于妇科内分泌疾病、生殖医学领域、性别异常等范畴。

对于AMH的检测，目前国内外采用的方法主要有酶联免疫法(ELISA)、化学发光法(CLIA)、电化学发光法、胶体金法和荧光免疫层析法。酶联免疫法主要采用96微孔板检测，由于定量准确，广泛应用于医院检验科，但检测时间长，步骤繁琐不便捷，检测精度较差；化学发光法和电化学发光法需要专用的分析仪，且价格昂贵，不适合单人份或较小批量检测用；胶体金法操作简单，使用方便，检测速度快，但不能对AMH进行准确的定量分析；当胶体金法与荧光免疫层析法结合使用时，对试纸条的要求较多，处理麻烦。

为了解决上述问题，克服现有技术AMH检测方法中所存在的问题，本发明提供一种采用三步双抗体夹心法酶联免疫对AMH进行定量检测，该方法步骤简明，操作简单，使用方便，能准确检测AMH浓度，对检测结果进行定量分析。

发明内容

本发明通过三步双抗体夹心法酶联免疫检测AMH含量，解决了现有技术中步骤繁琐，操作麻烦，仪器成本高，检测结果不准确等技术问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供的检测方法包括以下步骤：

(1)试剂配制：

A、AMH校准品B-F和AMH质控品Ⅰ&Ⅱ分别用纯化水溶解A，并轻轻振荡充分溶解、混匀后待用。

B、洗涤液：用纯化水25倍稀释浓缩洗液。