[发明专利]一个烟草慢阴离子通道蛋白NtSLAH8及其应用

说明书

本发明属于烟草基因工程技术领域，具体涉及一个烟草慢阴离子通道蛋白NtSLAH8及其应用专利申请。该基因CDS序列包括579bp碱基，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；其中第1位-388位核苷酸为特异性核酸片段。烟草慢阴离子通道蛋白NtSLAH8是烟草氯离子代谢的关键蛋白，通过病毒诱导的基因沉默（VIGS）的技术，抑制NtSLAH8基因表达后，转基因沉默植株中氯离子含量明显降低。基于此，可为培育低氯含量烟草新品种奠定良好基础，同时也为烟叶质量的稳定和卷烟质量改善提供了根本性的技术支撑。

技术领域

本发明属于烟草基因工程技术领域，具体涉及一个烟草慢阴离子通道蛋白NtSLAH8及其应用专利申请。

背景技术

针对烟草的已有研究普遍认为，烟叶中的氯离子含量以0.3~0.8为宜，在含量达到1%时会影响阴燃持火性，进一步高于1%时会出现黑灰熄火现象；另一方面，烟叶中氯离子含量过高时会造成淀粉积累多，叶片肥厚而脆，吸湿性大，使得存放时颜色易变深，产生不良气味。总之，烟叶中氯离子含量对于烟叶质量具有较为重要的直接影响。

基于烟叶中氯离子含量对烟草品质的直接影响和其重要性，部分研究人员对全国各地烟叶中氯离子含量进行了检测统计，结果表明（中国烟草总公司郑州烟草研究院，《中国烟叶质量白皮书（2015年）》）：河南2011年~2015年烤烟烟叶化学成分中氯离子含量（0.53%-0.65%）远高于全国均值（0.26%-0.30%）。此外，根据上烟集团对豫中烟区2012-2015年氯含量测定的平均值，尤其是2014年度数据（下部叶2.21%、中部叶2.09%及上部叶2.03%），豫中烟区近几年氯离子含量都远远高于全国水平。这些统计数据表明，部分地区烟叶质量不均一性、尤其是烟叶中氯离子含量的不均一性甚至偏高特点，已成为制约浓香型烟叶品质提高的瓶颈之一。

为解决烟叶氯离子含量偏高的问题，传统改善方式多是从栽培技术入手，通过优化田间管理措施、完善调制发酵技术来稳定和提升烟叶品质。但总体而言，这些措施并未从根本上改变这些烟叶质量偏低、工业实用性不强的局面。因而使得相关改进措施缺乏较好实用性。

随着基因组学尤其是基因编辑技术的快速发展，使得人们对于烟叶中氯离子积累与相关基因之间的关系认识越来越深入。基于已有研究已经知晓的是：慢阴离子通道（SLAC）蛋 白家族主要在植物阴离子（氯离子和硝酸根离子等）摄取和气孔开闭过程中起到重要作用。但由于SLAC基因家族基因较多，在不同植物中发挥功能差异较大，因而对于不同植物、不同SLAC基因的功能尚需进行进一步的研究和区分，从而能够有针对性的用于将来的植物改良。

发明内容

本发明目的在于提供一个烟草慢阴离子通道蛋白NtSLAH8（Slowly activatingAnion Channel Homologue, SLAH），该基因所编码的烟草慢阴离子通道蛋白NtSLAH8与Cl^-的吸收转运相关，基于这一功能，可为低氯离子含量的烟草新品种奠定基础。

本申请所采取的技术方案详述如下。

烟草慢阴离子通道蛋白NtSLAH8的编码基因NtSLAH8基因，该基因来源于烟草（Nicotiana tabacum），其CDS序列包括579bp碱基，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；其中第1位-388位核苷酸为特异性核酸片段。

PCR扩增获得所述NtSLAH8基因的方法，具体可参考如下：

（1）提取烟草样品的总RNA，并反转录为cDNA备用；

（2）设计扩增引物序列如下：

F：5’-CGCGAGCTCGGTACCATGGTTGCAAATCCAACT-3’，