[发明专利]一种改进的PB转座子系统及其用途

权利要求书

1.一种核酸构建体，其含有依次连接的控制PiggyBac转座酶表达的启动子、PiggyBac转座酶编码序列、PiggyBac转座子5’末端重复序列、任选的polyA加尾信号序列1、多克隆插入位点、polyA加尾信号序列2和PiggyBac转座子3’末端重复序列。

2.如权利要求1所述的核酸构建体，其特征在于，

所述PiggyBac转座子5’末端重复序列为截短的PiggyBac转座子5’末端重复序列；和/或

所述PiggyBac转座子3’末端重复序列为截短的PiggyBac转座子3’末端重复序列；和/或

所述核酸构建体不含有所述polyA加尾信号序列1；和/或

所述核酸构建体中除所述5’末端重复序列和3’末端重复序列所含的TTAA序列以外的其它TTAA序列被删除。

3.如权利要求1-2中任一项所述的核酸构建体，其特征在于，所述核酸构建体具有以下一项或多项特征：

(1)所述控制PiggyBac转座酶表达的启动子选自CMV启动子、SV40启动子、PGK启动子和鸡β-actin启动子，优选为CMV启动子，更优选地，所述启动子的序列如SEQ ID NO:1所示；

(2)所述PiggyBac转座酶编码序列含核定位信号，所述核定位信号选自c-myc核定位信号和SV40核定位信号；优选地，所述PiggyBac转座酶编码序列如SEQ ID NO:2所示；优选地，所述核定位信号位于所述PiggyBac转座酶编码序列的N端；

(3)所述PiggyBac转座子5’末端重复序列如SEQ ID NO:3所示；

(4)所述polyA加尾信号序列1如SEQ ID NO:4所述；

(5)所述多克隆插入位点如SEQ ID NO:5所示；

(6)所述polyA加尾信号序列2为SV40polyA加尾信号序列；优选地，所述polyA加尾信号序列2如SEQ ID NO:6所示；和

(7)所述PiggyBac转座子3’末端重复序列如SEQ ID NO:7所示。

4.如权利要求1所述的核酸构建体，其特征在于，所述核酸构建体选自：

(a)含有依次连接的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、任选的SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7的核酸构建体；

(b)在(a)所示的核酸构建体的基础上删除了除SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:7所含TTAA以外的其它TTAA的核酸构建体。

5.如权利要求1-4中任一项所述的核酸构建体，其特征在于，所述核酸构建体的多克隆位点可操作地插入了一个或多个相同或不同的表达框，或所述多克隆位点被替换为一个或多个相同或不同的表达框。

6.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体含有权利要求1-5中任一项所述的核酸构建体；

优选地，所述重组载体为重组克隆载体、重组真核表达质粒或者重组病毒载体；优选地，所述重组克隆载体为权利要求1-5中任一项所述的核酸构建体与pUC18、pUC19、pMD18-T、pMD19-T、pGM-T载体、pUC57、pMAX或pDC315系列载体经重组得到的重组载体；所述重组表达载体为权利要求1-5中任一项所述的核酸构建体与pCDNA3系列载体、pCDNA4系列载体、pCDNA5系列载体、pCDNA6系列载体、pRL系列载体、pUC57载体、pMAX载体或pDC315系列载体经重组得到的重组表达载体；所述重组病毒载体为重组腺病毒载体、重组腺相关病毒载体、重组逆转录病毒载体、重组单纯疱疹病毒载体或重组痘苗病毒载体。

7.含有权利要求1-5中任一项所述的核酸构建体或权利要求6或7所述的重组载体的重组细胞；优选地，所述重组宿主细胞为重组哺乳动物细胞，例如重组原代培养T细胞、Jurkat细胞、K562细胞、胚胎干细胞、肿瘤细胞、HEK293细胞或CHO细胞。