[发明专利]用于检测β淀粉样蛋白(Aβ)的磁微粒分离化学发光免疫测定法

权利要求书

1.人体β淀粉样蛋白(Aβ)磁微粒分离化学发光免疫检测方法，其特征在于，试剂盒组成包括：校准品、质控品试剂A、试剂B、清洗液浓缩液、发光底物液，其中，校准品为含一系列浓度的β淀粉样蛋白(Aβ)抗原，用于建立标准曲线；质控品为含一定浓度β淀粉样蛋白(Aβ)抗原的缓冲液配制而成；试剂A为含一定浓度磁微粒标记的β淀粉样蛋白(Aβ)抗体溶液；试剂B为含一定浓度碱性磷酸酶标记的β淀粉样蛋白(Aβ)抗体溶液；清洗液浓缩液用于配制清洗液；发光底物液为碱性磷酸酶(ALP)催化的发光底物溶液；检测方法包括：

(1)免疫反应：将待测样品与质控品、50μl试剂A、50μl试剂B依次加入反应管中，37℃条件下混合温育15min；

(2)磁分离：使磁微粒在磁场中沉降，去上清，加入200-500μl清洗液，去除磁场，然后再次使磁微粒在磁场中沉降，去除上清液；如此重复2-4次，以去除未结合的抗体和杂质；

(3)读值：加入发光底物液150μl，碱性磷酸酶(ALP)催化底物发光后采用利德曼自研化学发光检测仪测定相对发光强度(RLU)；

(4)算出含量：将待测样本的发光强度与校准品的标准曲线比对，使用四参数Logistic方程拟合可计算出待测样本中β淀粉样蛋白(Aβ)的含量。

2.根据权利要求1所述人体β淀粉样蛋白(Aβ)磁微粒分离化学发光免疫检测方法，其特征在于，所述试剂A的配置方法包括：将表面含有羧基(COOH-)活性基团的磁微粒进行磁分离，然后用活化缓冲液清洗3次；混悬后加入活化剂，活化后的磁微粒溶液与β淀粉样蛋白(Aβ)抗体按比例混合，使得β淀粉样蛋白(Aβ)抗体被共价偶联在磁微粒表面。

3.根据权利要求2人体β淀粉样蛋白(Aβ)磁微粒分离化学发光免疫检测方法，其特征在于，所述活化缓冲液为摩尔浓度0.05M的(2-(N-吗啡啉)乙磺酸)MES，pH6.0，所述活化剂为1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride(EDC)。

4.根据权利要求2人体β淀粉样蛋白(Aβ)磁微粒分离化学发光免疫检测方法，其特征在于，所述比例为20：1。

5.根据权利要求1人体β淀粉样蛋白(Aβ)磁微粒分离化学发光免疫检测方法，其特征在于，所述试剂B的配置方法包括：β淀粉样蛋白(Aβ)抗体、碱性磷酸酶(ALP)分别加入活化剂，除盐；活化后的β淀粉样蛋白(Aβ)抗体、碱性磷酸酶(ALP)按比例混合；分离纯化，除去未连接的β淀粉样蛋白(Aβ)抗体和碱性磷酸酶(ALP)，将连接物保存于4℃。

6.根据权利要求5人体β淀粉样蛋白(Aβ)磁微粒分离化学发光免疫检测方法，其特征在于，β淀粉样蛋白(Aβ)抗体加入的活化剂为2-Iminothiolane hydrochloride(2-IT)，碱性磷酸酶(ALP)加入的活化剂为Succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate(SMCC)。

7.根据权利要求5人体β淀粉样蛋白(Aβ)磁微粒分离化学发光免疫检测方法，其特征在于，所述比例为1：1。

8.根据权利要求5人体β淀粉样蛋白(Aβ)磁微粒分离化学发光免疫检测方法，其特征在于，所述除盐为使用Sephadex G25凝胶柱子除盐，所述分离纯化为使用Supperdex200凝胶层析柱分离纯化。