[发明专利]用于检测β淀粉样蛋白(Aβ)的磁微粒分离化学发光免疫测定法

说明书

本发明公开了一种人体β淀粉样蛋白(Aβ)磁微粒分离化学发光免疫检测方法，试剂盒组成包括：校准品、质控品试剂A、试剂B、清洗液浓缩液、发光底物液，其中，校准品为含一系列浓度的β淀粉样蛋白(Aβ)抗原，用于建立标准曲线；质控品为含一定浓度β淀粉样蛋白(Aβ)抗原的缓冲液配制而成；试剂A为含一定浓度磁微粒标记的β淀粉样蛋白(Aβ)抗体溶液；试剂B为含一定浓度碱性磷酸酶标记的β淀粉样蛋白(Aβ)抗体溶液；清洗液浓缩液用于配制清洗液；发光底物液为碱性磷酸酶(ALP)催化的发光底物溶液。本发明极大地提高了免疫反应的信号强度和灵敏度，使低含量物质在进行免疫结合时也能产生很强的化学发光信号，为人体β淀粉样蛋白(Aβ)的检测提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，提供了用于检测β淀粉样蛋白(Aβ)的磁分离化学发光免疫测定法，适用于人血清β淀粉样蛋白(Aβ)定量检测。

背景技术

随着经济的迅猛发展、科技的日益进步、人们生活节奏的加快，人口老龄化问题已成为全世界共同关注的问题，它对各个国家或地区的发展产生了深远影响，已经引起国际社会的广泛关注。而老年人的心理及身体健康问题也逐渐成为全社会关注的焦点。其中老年痴呆症是老年人脑部功能失调的一种表现，是以智力衰退、行为及人格变化为特征。

阿尔兹海默病(Alzheimer’sdisease，AD)是老年痴呆症一种常见形式。目前全世界大约有2500万AD患者，多为老年人。该病患不仅患者自身痛苦，而且对于其家庭乃至整个社会都会造成极为消极的影响。阿尔茨海默症发病率随着年龄增加而提高，在65岁以上的人中有10％的人患阿尔茨海默症，在85岁以上的人中有50％的人患有阿尔茨海默症，AD目前尚无有效疗法。

迄今为止，AD发病的确切机理尚未完全清楚，但有相关的病理发生的假说，主要包括淀粉样蛋白假说、过度磷酸化tau蛋白假说、金属离子假说、神经递质代谢障碍假说、代谢紊乱假说、自由基损伤假说、神经元凋亡及免疫炎症假说。其中淀粉样蛋白假说是至今最广为阿尔茨海默症研究者接受的学说。

1、淀粉样蛋白假说

淀粉样蛋白假说起始于1984年GeorgeGlenner从老年斑分离出并鉴定了β淀粉样蛋白；经典的淀粉样蛋白假说认为β淀粉样蛋白纤维化并在老年斑中沉淀是阿尔茨海默症病理发生的根本原因，其它阿尔茨海默症病理特征(包括神经纤维缠结、神经突触丢失、神经元凋亡)都是由β淀粉样蛋白积累引起；该假说的提出标志着阿尔茨海默症的研究进入新的时代。如图1，AD患者的大脑在显微镜下观察到的不可溶的淀粉样蛋白积聚物，其中箭头标示细胞外的老年斑，三角标示细胞中的神经纤维缠结。AD老年斑的主要成分为β-淀粉样蛋白——淀粉样前体蛋白(APP)经分泌酶水解后产生的蛋白质。Aβ量的增加会使其积聚形成寡聚物并形成不可溶的纤维，成为可扩散的老年斑。神经纤维缠结则定位于细胞内，是由一种名为Tau蛋白的蛋白质所形成的不可溶螺旋形纤维丝。

2、β-淀粉样蛋白的产生

(1)定义

淀粉样前体蛋白(amyloidprecursorprotein，APP)是一类与AD的发生、发展密切相关的I型跨膜蛋白，具有膜受体样结构。在生物体内，APP经β分泌酶和分泌酶的顺次切割产生β-淀粉样蛋白，后者是AD的主要致病因素。

β-淀粉样蛋白(β-amyloidprotein，Aβ)，分子量约4kDa，由淀粉样前体蛋白水解而来，由细胞分泌，在细胞基质沉淀聚积后具有很强的神经毒性作用。它是一种主要含有40个或42个氨基酸的多肽，是由前体蛋白APP经过两次蛋白酶切而来。且在三维结构中呈β折叠，故称为“β淀粉样蛋白”。

(2)来源

β-淀粉样蛋白可由多种细胞产生，循环于血液、脑脊液和脑间质液中，大多与伴侣蛋白分子结合，少数以游离状态存在。