[发明专利]尿四种微量蛋白定量联检荧光免疫层析试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种尿四种微量蛋白定量联检荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，包括免疫层析试纸条和荧光微球标记的抗原溶液，所述的免疫层析试纸条上包被有白蛋白捕获抗体、α₁-微球蛋白捕获抗体、转铁蛋白捕获抗体、β₂-微球蛋白捕获抗体和蛋白A；所述的荧光微球标记的抗原溶液包括荧光微球标记的白蛋白溶液、荧光微球标记的α₁-微球蛋白溶液、荧光微球标记的转铁蛋白溶液和荧光微球标记的β₂-微球蛋白溶液，所述的荧光微球还标记有IgG免疫球蛋白。

2.根据权利要求1所述的尿四种微量蛋白定量联检荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述荧光微球是时间分辨荧光微球和量子点荧光微球中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的尿四种微量蛋白定量联检荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述的荧光微球标记的抗原溶液还包括微球保存液。

4.根据权利要求1所述的尿四种微量蛋白定量联检荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述的荧光微球标记的抗原溶液中各被标记的抗原蛋白的浓度如下：白蛋白100-500μg/ml；α₁-微球蛋白50-250μg/ml；转铁蛋白50-250μg/ml；β₂-微球蛋白20-100μg/ml。

5.根据权利要求1所述的尿四种微量蛋白定量联检荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述的免疫层析试纸条上白蛋白捕获抗体的包被浓度为1.0-2.0mg/ml，α₁-微球蛋白捕获抗体的包被浓度为0.5-1.5mg/ml，转铁蛋白捕获抗体的包被浓度为0.5-1.5mg/ml，β₂-微球蛋白捕获抗体的包被浓度为0.1-1.0mg/ml，蛋白A的包被浓度为0.05-0.5mg/ml。

6.一种试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如权利要求1-5任意一项所述的尿四种微量蛋白定量联检荧光免疫层析试剂盒中的免疫层析试纸条的制备和如权利要求1-5任意一项所述尿四种微量蛋白定量联检荧光免疫层析试剂盒中的的荧光微球标记的抗原溶液的制备。

7.根据权利要求6所述的一种试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的免疫层析试纸条的制备方法如下：

步骤A：在硝酸纤维素膜上依次设置T₁线、T₂线、T₃线、T₄线和C线，在T₁线上包被白蛋白捕获抗体、T₂线上包被α₁-微球蛋白捕获抗体、T₃线上包被转铁蛋白捕获抗体、T₄线上包被β₂-微球蛋白捕获抗体和C线上包被蛋白A，包被完成后干燥；

步骤B：将样本垫、经步骤A处理后的硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC粘性底板按顺序组装；

步骤C：将组装后的板切割成形成免疫层析试纸条，常温下加干燥剂密封保存。

8.根据权利要求6所述的一种试剂盒的制备方法，其特征在于，所述荧光微球标记的抗原溶液的制备方法如下：

步骤a：将荧光微球加入硼酸缓冲液中，稀释至荧光微球的浓度为0.1-1mg/ml，再加入EDC，混匀，25℃孵育10-30min，得到混合液1。

步骤b：将混合液1离心并去除上清液，重新悬浮后分别加入白蛋白、α₁-微球蛋白、转铁蛋白、β₂-微球蛋白和IgG免疫球蛋白，25℃孵育1-2h，得到混合液2；

步骤c：将混合液2离心并去除上清液，加入封闭液封闭1-2h，得到混合液3；

步骤d：将混合液3离心并去除上清液，加入微球保存液清洗并重新悬浮，在2-8℃下保存。