[发明专利]一种基于石仙桃种子的原球茎培养的方法

权利要求书

1.一种基于石仙桃种子的原球茎培养的方法，其特征在于：所述的方法包括以下依序进行的步骤：

（1）外植体的准备阶段

于每年11月至次年的3月采集野生的且无开裂的石仙桃蒴果；

（2）无菌处理阶段

将步骤（1）所准备的石仙桃蒴果，用无菌水冲洗干净；

然后转移到灭菌后的超净工作台上，用71-74%的酒精棉擦拭蒴果表面，再用无菌水冲洗干净，之后转入到无菌瓶内，用0.1-1.6%的升汞灭菌8-18分钟，最后用无菌水冲洗干净；

（3）初代萌动阶段

接着切开步骤（2）中灭菌好的蒴果并取出种子，将种子撒播在初代萌动培养基上，培养20-30天，培养环境如下：pH为5.6-5.9，温度为24±2℃，黑暗条件下，置于摇床上，转速30-50转/分钟；

所述的初代萌动培养基由以下物质组成：硝酸铵1400-1500 mg/L + 硝酸钾1710-1810mg/L + 氯化钙550-700 mg/L + 硫酸镁400-450 mg/L + 磷酸二氢钾200-250 mg/L + 硼酸6.0-6.5 mg/L + 乙二胺四乙酸二钠37.0-37.5 mg/L +硫酸锰22.0-23.0 mg/L + 硫酸锌9.0-10.0 mg/L + 硫酸铁27.0-28.0 mg/L + 肌醇90-100 mg/L + 椰子汁30-60 g/L +花宝2号0.1-0.3g/L + 蛋白胨0.7-0.9g/L +蔗糖 12-17g/L + 琼脂3-5g/L；

（4）原球茎培养及增殖阶段

将经步骤（3）初代萌动阶段的种子，接种到原球茎培养及增殖培养基中培养45-55天，培养环境如下：pH为5.8-6.0，温度为24±2℃，置于摇床上，转速50-70转/分钟，光照强度500-1500Lx，光照周期为10-14 h/d；

所述的原球茎培养及增殖培养基由以下物质组成：硝酸铵1400-1500 mg/L+硝酸钾1710-1810 mg/L+氯化钙550-700 mg/L+硫酸镁400-450 mg/L+磷酸二氢钾200-250 mg/L+硼酸6.0-6.5 mg/L+乙二胺四乙酸二钠37.0-37.5 mg/L+硫酸锰22.0-23.0 mg/L+硫酸锌9.0-10.0 mg/L+硫酸铁27.0-28.0 mg/L+肌醇90-100 mg/L + 6-BA 1.2-1.8 mg/L + NAA0.1-0.4 mg/L + 2,4-D 0.2-0.5 mg/L +花宝2号0.6-0.9g/L + 椰子汁80-100 g/L + 酵母提取物6-9g/L + 水解酪蛋白4-8 g/L + 蔗糖12-17g/L。

2.根据权利要求1所述的一种基于石仙桃种子的原球茎培养的方法，其特征在于：所述的初代萌动培养基中的椰子汁的浓度为45 g/L ，花宝2号的浓度为0.2g/L，蛋白胨的浓度为0.8g/L，蔗糖的浓度为14 g/L，琼脂的浓度为4 g/L。

3.根据权利要求1所述的一种基于石仙桃种子的原球茎培养的方法，其特征在于：所述的原球茎培养及增殖培养基中6-BA 的浓度为1.6 mg/L，NAA 的浓度为0.3 mg/L ，2,4-D的浓度为 0.4 mg/L，花宝2号的浓度为0.7g/L，椰子汁的浓度为90 g/L，酵母提取物的浓度为7 g/L ，水解酪蛋白的浓度为6 g/L，蔗糖的浓度为14 g/L。