[发明专利]一种基于石仙桃种子的原球茎培养的方法

说明书

本发明涉及一种基于石仙桃种子的原球茎培养的方法，包括以下依序进行的步骤：(1)外植体的准备阶段、(2)无菌处理阶段、(3)初代萌动阶段、(4)原球茎培养及增殖阶段。本发明能培育出石仙桃的原球茎，而且该原球茎增殖效率高，平均一颗种子约分化生成6.33个原球茎。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种基于石仙桃种子的原球茎培养的方法。

技术背景

石仙桃(Pholidota chinensis Lindl.)系兰科(Orchidaceae)石仙桃属(Pholidota)多年附生草本植物，俗称石橄榄。植株高15-25㎝，由须根、根状茎、假鳞茎、叶、花、果组成(林来官,张永田等.福建植物志[M].福州:福建科学技术出版社,1994,第六卷:636-637)。在我国，石仙桃分布于福建、广东、广西和云南等省，在福建省，石仙桃主要分布于福州、平和、长乐、南靖等地区。石仙桃生于林中或林缘树上、岩壁上或岩石上，海拔通常在1500m以下，少数可达2500m(陈心启,吉占和,郎楷永等.中国植物志[M].北京:科学出版社,1999,18:388-399)。

石仙桃作为中草药具有悠久的历史，始载于《生草药性备要》。以全草或假鳞茎入药，其性甘味凉，具有养阴、清热、利湿消瘀的功效(南京中医药大学.中药大辞典[M].上海:上海科学出版社,2006)，民间常用来治疗高血压、头晕和各种原因引起的头疼等。用其制成的“头痛定糖浆”临床上用于治疗神经功能性头痛、脑震荡后遗症，已应用多年，治疗效果良好(中华人民共和国药典委员会.中药成方制剂(第九册).北京:北京化学工业出版社,1994:67)。

近几年对其药理进行了比较多的研究，报道其在镇静、催眠、抗癌、抗疲劳等方面都有作用(刘建新,周青,连其深.石仙桃对中枢神经系统抑制作用.赣南医学院学报,2004,24(2):119-121；王光辉,郭晓宇,王乃利等.云南石仙桃氯仿萃取物活性部位对入肝癌细胞HepG₂的周期抑制作用.沈阳药科大学学报,2006,23(4):240-243；刘建新,周青,连其深.石仙桃的镇痛作用的研究.赣南医学院学报,2002,22(2):105-107)。同时现在对其化学成分做了不同方法的提取和分离，得到天麻苷元、原儿茶醛、胡萝卜苷等化学成分(舒文海.石仙桃的局麻作用研究.中国药学杂志,1989,24(5):304；林丽聪,张怡评,吴春敏等.石仙桃叶化学成分研究.时珍国医国药,2009,20(4):922-923；李兵,郭环娟,容羡贤.石仙桃质量标准研究.中国药业,2010,19(6):19-20；林丽聪,吴春敏,陈海滨等.RP—HPLC法测定石仙桃中天麻素和天麻苷元.中草药.2008,39(2):283-285)。

随着临床对石仙桃研究的深入和新功能的开发，人们的需求量与日俱增，但由于其生长缓慢、生物量小、自然繁殖率低、对生境要求苛刻，自然资源贮藏量及可开发利用量非常有限，长期掠夺式采挖野生资源，已导致野生资源锐减并逐渐匮乏，不少原产地石仙桃资源呈现稀缺甚至濒危趋势。

发明内容

本发明提供一种基于石仙桃种子的原球茎培养的方法，采用本方法能将石仙桃种子培育为石仙桃原球茎，而且该原球茎增殖效率高。

本发明通过以下技术方案实现：

一种基于石仙桃种子的原球茎培养的方法，所述的方法包括以下依序进行的步骤：

(1)外植体的准备阶段

于每年11月至次年的3月采集野生的且无开裂的石仙桃蒴果；

(2)无菌处理阶段

将步骤(1)所准备的石仙桃蒴果，用无菌水冲洗干净；

然后转移到灭菌后的超净工作台上，用71-74％的酒精棉擦拭蒴果表面，再用无菌水冲洗干净，之后转入到无菌瓶内，用0.1-1.6％的升汞灭菌8-18分钟，最后用无菌水冲洗干净；

(3)初代萌动阶段