[发明专利]一种小分子岩藻多糖的制备方法

权利要求书

1.一种小分子岩藻多糖的制备方法，其特征在于所述方法为：(1)粗岩藻多糖提取：将干海带粉与溶剂混合，在60-100℃浸提1-5h，将浸提液离心，获得提取液；并将提取液减压浓缩至1/2-1/15体积，获得浓缩液；所述溶剂为体积浓度95％乙醇水溶液或去离子水；所述溶剂体积用量以干海带粉质量计为25-50ml/g；然后向浓缩液中加质量浓度1％～4％CaCl₂水溶液，搅拌至无沉淀产生，离心，取上清液浓缩至1/2～1/3倍体积后，采用sevage法除蛋白，取水层旋转蒸发除去残留的氯仿，用14KDa透析袋于去离子水中透析；取截留液加入无水乙醇至乙醇体积浓度为50％-90％，搅拌，在4℃下静置过夜，离心，沉淀干燥，得粗岩藻多糖；(2)粗岩藻多糖纯化：将粗岩藻多糖用去离子水溶解后，上样DEAE-52纤维素阴离子交换柱，分别用去离子水，0.3M NaCl水溶液、0.6M NaCl水溶液、0.9M NaCl水溶液、1.5M NaCl水溶液、2.0M NaCl水溶液进行洗脱，分别收集0.9M NaCl水溶液、1.5M NaCl水溶液、2.0MNaCl水溶液的流出液，分别用14KDa透析袋于去离子水中透析，取截留液冻干，分别获得三种纯化岩藻多糖；(3)小分子岩藻多糖的制备：将步骤(2)三种纯化岩藻多糖用浓度为0.01～0.2mol/L的HCl水溶液制成质量浓度为0.5～5％的岩藻多糖溶液，于30℃-100℃下搅拌水解10min-2h，反应液调pH为7后，用3.5KDa透析袋于去离子水中透析24h，取截留液浓缩至1/3体积后，加入体积浓度10～30％H₂O₂水溶液，再加入体积浓度5～20％氨水调节pH为8.5，室温避光放置30min，离心，上清液用3.5KDa透析袋于去离子水中透析，取截留液冻干，分别获得小分子岩藻多糖。

2.如权利要求1所述小分子岩藻多糖的制备方法，其特征在于步骤(1)所述溶剂体积用量以干海带粉质量计为40ml/g；所述溶剂为去离子水。

3.如权利要求1所述小分子岩藻多糖的制备方法，其特征在于步骤(1)浸提重复2次，具体为：将干海带粉与溶剂混合，在60-100℃浸提1-5h，将浸提液离心，沉淀加入等体积溶剂同样条件下浸提1次，合并两次浸提液即获得提取液。

4.如权利要求1或3所述小分子岩藻多糖的制备方法，其特征在于步骤(1)所述浸提条件为90℃浸提3h。

5.如权利要求1所述小分子岩藻多糖的制备方法，其特征在于步骤(1)sevage法除蛋白按如下步骤操作：取上清液浓缩至1/2～1/3倍体积后，加入同体积的sevage溶液，800r/min磁力搅拌器下搅拌20min，分液漏斗分成上层水层和下层sevage溶液层，取上层离心，收集上清液；重复上述除蛋白操作，直至水层与sevage溶液层中间未出现白色层；所述sevage溶液为体积比4:1的氯仿：正丁醇。

6.如权利要求1所述小分子岩藻多糖的制备方法，其特征在于步骤(2)粗岩藻多糖用去离子水溶解制成质量浓度为1％-5％的溶液。

7.如权利要求1所述小分子岩藻多糖的制备方法，其特征在于步骤(3)水解反应温度为60℃，时间为1h。

8.如权利要求1所述小分子岩藻多糖的制备方法，其特征在于步骤(3)岩藻多糖用浓度为0.1mol/L的HCl水溶液制成质量浓度为1％的岩藻多糖溶液。

9.如权利要求1所述小分子岩藻多糖的制备方法，其特征在于步骤(3)H₂O₂水溶液体积加入量为浓缩后截留液体积的1/2-1/4倍。