[发明专利]一种黄曲霉毒素B1的快速检测方法

权利要求书

1.腐植酸作为荧光淬灭材料结合DNA-CDs复合物在黄曲霉毒素B1检测中的应用；

所述DNA-CDs复合物是由CDs与氨基功能化的适配体DNA交联得到；所述适配体DNA是能够与黄曲霉毒素B1特异结合的单链核酸分子。

2.一种检测黄曲霉毒素B1的试剂盒，其特征在于，包括： DNA-CDs复合物和腐植酸；

所述DNA-CDs复合物是由CDs与氨基功能化的适配体DNA交联得到；

所述适配体DNA是能够与黄曲霉毒素B1特异结合的单链核酸分子。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所检测的黄曲霉毒素为AFB1；所述适配体DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述CDs由如下方法制备而成：

将柠檬酸和乙二胺溶于去离子水中，搅拌20-40分钟；然后在180-220℃下加热4-6h，冷却后通过透析膜纯化，冷冻干燥，得到干燥的CDs。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA-CDs复合物是由CDs与氨基功能化的适配体DNA通过EDC/NHS交联制备得到。

6.一种黄曲霉毒素B1的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将DNA-CDs复合物溶于氯化钠溶液中，使DNA-CDs复合物的浓度为0.06-0.08 mM，调节pH至5-8，孵育，测定荧光强度；加入腐植酸，使腐植酸的浓度为0.04-0.16mg/ml，反应2-3min，测定荧光强度；

（2）反应后再加入待测样品，测定荧光强度，从而实现对待测样品中黄曲霉毒素B1的检测。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述氯化钠溶液中氯化钠的浓度为150mM-250mM。

8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）和步骤（2）中，在360nm激发光下测定荧光强度。

9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，步骤（2）中，所述对待测样品中黄曲霉毒素B1的检测为定量检测或定性检测；

当为定量检测时，按照如下确定所述待测样品中黄曲霉毒素B1的含量：根据所测定荧光强度值计算荧光淬灭率，代入线性方程，从而计算所述待测样品中黄曲霉毒素B1的含量；

当为定性检测时，按照如下确定所述待测样品中是否含有黄曲霉毒素B1：

若加入待测样品后所测定的荧光强度值高于对照值，则所述待测样品中含有或候选含有黄曲霉毒素B1；若加入待测样品后所测定的荧光强度值低于或等于对照值，则所述待测样品中不含黄曲霉毒素B1；

所述对照值是用不含黄曲霉毒素B1的溶液代替所述待测样品进行步骤（1）-（2）所测得的荧光强度值。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述线性方程按照如下步骤获得：

用系列已知浓度的黄曲霉毒素B1标准品代替所述待测样品进行步骤（1）-（2），测得各浓度的黄曲霉毒素B1标准品对应的荧光强度，计算荧光淬灭率，从而获得荧光淬灭率与黄曲霉毒素B1的浓度之间的线性方程。