[发明专利]一种黄曲霉毒素B1的快速检测方法

说明书

本发明公开了一种黄曲霉毒素AFB1的快速检测方法，本发明以简单绿色的合成方式制备了DNA‑CDS复合物，基于腐植酸与DNA‑CDS之间的π‑π堆积作用，构建了一种低成本新型黄曲霉毒素荧光检测体系，以DNA‑CDs为荧光探针，直接利用AFB1的荧光，实现了黄曲霉毒素的高效、灵敏检测。这是首次使用方便易得的腐植酸作为荧光猝灭材料进行毒素检测。检测方法操作简便、靶向性强，灵敏度高，成本低。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及一种黄曲霉毒素B1的快速检测方法。

背景技术

黄曲霉毒素是一类由黄曲霉和寄生曲霉产生的二氢呋喃香豆素的衍生物，是一种常见的真菌毒素，具有致畸、致突变、致癌作用，被世界卫生组织划定为I类致癌物。黄曲霉毒素主要包括黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)和黄曲霉毒素G2(AFG2)，其中，AFB1污染广泛、毒性最强，严重危害人们的身体健康和食品安全。因此开发高灵敏的AFB1检测方法已成为国际关注的重点。

目前AFB1的检测方法主要有：色谱法、酶联免疫吸附测定、电感耦合等离子体质谱和毛细管电泳等；其中，色谱法是用于定性/定量检测食品化学污染物黄曲霉毒素AFB1最常规的分析技术，包括高效液相色谱/质谱、液相色谱/质谱、反相高效液相色谱、薄层色谱和气相色谱与质谱联用等，但繁琐的样品预处理程序和昂贵的仪器是色谱法存在的主要问题。酶联免疫吸附测定、电感耦合等离子体质谱和毛细管电泳等方法又存在操作复杂、检测耗时的问题。荧光法用于检测食品化学污染物，具有操作简便，快速自动检测等优点，近年来荧光生物传感器开始应用于黄曲霉毒素检测，该法虽然表现出了较高的灵敏性，但仍然存在猝灭剂剥离困难，单层纳米材料难制备，量子产率低等问题。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种黄曲霉毒素B1的快速检测方法，实现了黄曲霉毒素B1的高效、灵敏检测，该检测方法的操作简便、靶向性强、灵敏度高、成本低。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供腐植酸作为荧光淬灭材料在黄曲霉毒素检测中的应用。

腐植酸(Humic acid)是一种既可以通过提纯的手段从自然界中获得，也可以通过堆肥等过程得到的高分子聚合物。本发明研究发现，由于腐植酸存在大量的醌类单元、芳香环和糖基等活性结构，可以强烈地吸附核酸适配体(单链DNA)，尤其醌式结构，能够基于荧光共振能量转移猝灭其吸附的适配体修饰的荧光基团；当适配体与目标物(黄曲霉毒素)结合之后，又会从腐植酸的表面解吸附，体系的荧光即可恢复。由此，腐植酸可以作为荧光淬灭材料用于黄曲霉毒素的检测。

本发明的第二方面，提供一种检测黄曲霉毒素的试剂盒，包括：DNA-CDs复合物和腐植酸；

所述DNA-CDs复合物是由碳点(Cdots，CDs)与氨基功能化的适配体DNA交联得到；

所述适配体DNA是能够与黄曲霉毒素特异结合的单链核酸分子。

黄曲霉毒素主要包括AFB1、AFB2、AFG1和AFG2，在进行相应种类黄曲霉毒素检测时，从寡聚核苷酸文库中筛选得到可以与目标分子(黄曲霉毒素)特异结合的单链核酸分子，将其作为适配体DNA。

作为一种优选的方案，本发明提供一种检测黄曲霉毒素B1的试剂盒，包括：DNA-CDs复合物和腐植酸；

所述DNA-CDs复合物是由CDs与氨基功能化的适配体DNA交联得到；

所述适配体DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

作为优选，所述CDs由如下方法制备而成：