[发明专利]一种用于检测CPV核酸的试剂盒、RPA引物对、探针及方法

权利要求书

1.一种用于检测CPV核酸的试剂盒，其包括RPA反应体系，其特征在于，所述的RPA反应体系包括RPA引物探针混合液，所述RPA引物探针混合液包括一引物对和探针，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述探针如5’SEQ ID NO.3+FAM-dt+THF+BHQ1-dt+SEQ ID NO.4+C3Spacer 3’所示。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的RPA反应体系的引物的浓度均为5～20μM，较佳地为10μM；所述探针的浓度为5～10μM，较佳地为10μM。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的RPA反应体系还包括RT反应液、核心反应液、反应缓冲液、Exo反应液、探针酶混合物、醋酸镁和dNTP；较佳地：

所述醋酸镁的浓度为260～300μM，优选280μM；

和/或，所述dNTP的浓度为20～220μM，优选200μM。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述的引物探针混合液由所述引物对和所述探针组成，所述引物对中各引物的量为2.1μL、浓度为10μM，所述探针的量为0.6μL、浓度为10μM；所述核心反应液的量为2.5μL，所述RT反应液的量为1μL，所述反应缓冲液的量为25μL，所述探针酶混合物的量为5μL，以及所述Exo反应液的量为1μL；所述醋酸镁的量为2.5μL、浓度为280μM；所述dNTP的量为7.2μL、浓度为11mM；较佳地：

所述的核心反应液为20倍核心反应液；

和/或，所述的反应缓冲液为2倍反应缓冲液；

和/或，所述的探针酶混合物为10倍探针酶混合物；

和/或，所述的RT反应液为50倍RT反应液；

和/或，所述的Exo反应液为50倍Exo反应液。

5.如权利要求1～4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括阴性对照，所述的阴性对照优选ddH₂O。

6.一种检测CPV核酸的引物对，其特征在于，所述的引物对的核苷酸序列分别如序列表中SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；较佳地，所述的检测为RPA检测。

7.一种检测CPV核酸的探针，其特征在于，所述的探针如5’SEQ ID NO.3+FAM-dt+THF+BHQ1-dt+SEQ ID NO.4+C3Spacer 3’所示；较佳地，所述的检测为RPA检测。

8.一种检测CPV核酸的组合，所述的组合包括引物对和探针，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列分别如序列表中SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述探针如5’SEQ IDNO.3+FAM-dt+THF+BHQ1-dt+SEQ ID NO.4+C3Spacer 3’所示；较佳地，所述的检测为RPA检测。

9.如权利要求6所述的引物对、如权利要求7所述的探针，或者权利要求8所述的组合在制备检测CPV的试剂盒中的应用。

10.一种非诊断目的的检测CPV的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

(1)使用DNA提取试剂提取待检样品中的总DNA；

(2)以步骤(1)提取的总DNA为模板，利用权利要求1～5任一项所述试剂盒中的RPA反应体系进行RPA反应，所述RPA反应中扩增反应的时间优选25min、温度优选39℃；

(3)分析检测结果。