[发明专利]一种细胞外基质修饰的多层软组织修复材料及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种细胞外基质修饰的多层软组织修复材料，其特征在于：它是由聚氨酯粘接的细胞外基质修饰的双层复合材料；其中，双层复合材料的一层是小肠黏膜下层膜，另一层是聚氨酯与小肠黏膜下层粉末混合后交联而成的聚氨酯/小肠黏膜下层复合材料；所述细胞外基质修饰为细胞外基质修饰小肠黏膜下层膜和/或细胞外基质修饰聚氨酯/小肠黏膜下层复合材料；所述小肠黏膜下层膜与聚氨酯/小肠黏膜下层复合材料层的厚度比为1:10～1:1000；所述用于粘接的聚氨酯的用量为0.02～1mL/cm²；所述聚氨酯为水性聚氨酯乳液；所述水性聚氨酯乳液的固含量为9wt％～40wt％。

2.根据权利要求1所述的修复材料，其特征在于：所述细胞外基质修饰的双层复合材料的制备方法如下：

(1)在小肠黏膜下层膜上涂一层聚氨酯乳液后将其粘贴在聚氨酯/小肠黏膜下层复合材料上，37℃下烘干，即得双层复合材料；其中，所述聚氨酯乳液的用量为0.02～1mL/cm²；

(2)在双层复合材料上复合细胞；所述双层复合材料每平方厘米上复合1×10⁴～1×10⁸个细胞；

(3)取复合了细胞的双层复合材料，脱细胞处理，即得。

3.根据权利要求2所述的修复材料，其特征在于：所述脱细胞处理方法为：

将脱细胞溶液滴加在复合了细胞的双层复合材料上，处理10～20min，清洗，冻干，即可。

4.根据权利要求3所述的修复材料，其特征在于：所述脱细胞溶液为含20mM NH₄OH的浓度为0.5％的Triton X-100溶液；所述处理时间为15min；所述清洗液为PBS；所述冻干为冷冻干燥，所述冷冻干燥的温度为-40℃，冷冻干燥的时间为24h。

5.根据权利要求2所述的修复材料，其特征在于：所述复合了细胞的双层复合材料为小肠黏膜下层膜复合了细胞，和/或，聚氨酯/小肠黏膜下层复合材料层复合了细胞。

6.根据权利要求2所述的修复材料，其特征在于：所述小肠黏膜下层膜制备方法如下：

取小肠，去除浆膜层和肌层，脱脂，脱细胞，去垢，冻干，灭菌，即得；

其中，所述脱脂是用体积比为1:1的甲醇和三氯甲烷的混合溶液浸泡10～14h，去离子水冲洗；

和/或，所述脱细胞采用酶消化，在4℃环境中，在浓度为0.25％的胰酶溶液浸泡过夜，生理盐水冲洗去除胰酶；

和/或，所述去垢是在浓度为0.5％的十二烷基硫酸钠溶液浸泡4～6h，去离子水清洗；

和/或，所述灭菌是利用环氧乙烷灭菌。

7.根据权利要求2所述的修复材料，其特征在于：所述聚氨酯/小肠黏膜下层复合材料的制备方法如下：

将聚氨酯乳液与小肠黏膜下层粉末共混，混悬溶液导入模具后，冻干成型，交联，洗涤，冷冻干燥，即得；

其中，所述聚氨酯乳液与小肠黏膜下层粉末的质量比为5:1～9:1；

和/或，所述冻干为-40℃低温冰箱预冻24h后，冷冻干燥；

和/或，所述交联使用的交联溶液为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的混合溶液；

和/或，所述交联为在37℃条件下，避光反应30～40h。

8.根据权利要求7所述的修复材料，其特征在于：所述小肠黏膜下层粉末的制备方法如下：

取小肠，去除浆膜层和肌层，脱脂，脱细胞，去垢，冻干，低温粉碎，灭菌，即得；

其中，所述脱脂是用体积比为1:1的甲醇和三氯甲烷的混合溶液浸泡10～14h，去离子水冲洗；

和/或，所述脱细胞采用酶消化，4℃条件下，在浓度为0.25％的胰酶溶液浸泡过夜，生理盐水冲洗去除胰酶；

和/或，所述去垢是在浓度为0.5％的十二烷基硫酸钠溶液浸泡4～6h，去离子水清洗；

和/或，所述低温粉碎是经液氮冷却后，使用球磨仪进行低温粉碎,并过200目筛；

和/或，所述灭菌是利用环氧乙烷灭菌。