[发明专利]一种HIV抗原-受体三聚体复合物的解离因子的应用

说明书

本发明公开了一种可以在HIV感染初期有效解离HIV抗原‑受体三聚体复合物，从而降低病毒载量的解离因子vMIP‑II的应用及阐述其作用机制，属于生物技术领域。本发明首先通过一系列实验发现vMIP‑II可以在HIV感染的急性期通过解离HIV靶细胞上的gp120‑CD4‑CCR5三聚体，阻碍病毒RNA的进入并释放出游离的gp120蛋白，起到保护CD4+T细胞的作用。游离的gp120蛋白可以被APC捕获，并且呈递给CD8+T细胞，使其分化成为特异性的效应CD8+T细胞，增强机体的细胞免疫，清除受感染的细胞，所以vMIP‑II既是CD4+T细胞的保护剂，也是CD8+T细胞的刺激因子，并因此降低了早期的病毒设定点，减少了病毒潜伏库，显著地延缓了艾滋病的进展。与之前的研究相比，我们的实验说明了vMIP‑II这种抗HIV感染因子存在新的抗艾滋病机制，这为预防和治疗艾滋病提供了新的策略。

技术领域

本发明属于生物技术领域，公开了一种可以在HIV感染初期有效解离HIV抗原-受体三聚体复合物的解离因子vMIP-II的应用及阐述其作用机制。

背景技术

CD8 + T细胞是T细胞的亚群，其在疾病防御中具有重要作用，主要针对病毒和肿瘤细胞。当初始CD8 + T细胞在抗原呈递细胞（APC）通过I类MHC分子呈现内源肽时，会分化为效应细胞。这个过程需要共刺激分子，例如CD80 / 86的相互作用，和通常由DC和活化的CD4 + T细胞提供的细胞因子信号。

一旦初始特异性CD8 + T细胞被激活，有效反应需要克隆扩增并形成能够识别来自病毒感染或肿瘤细胞的肽的初级效应细胞，导致通过穿孔素，颗粒酶和Fas/ FasL的相互作用直接杀死携带抗原的细胞。此外，还可以释放具有抗微生物作用的细胞因子，如TNF-α和IFN-γ，以及趋化因子，如MIP-1α/β和RANTES。所有这些机制都有助于清除改变的细胞。

在HIV感染期间，感染的发病机制和HIV进展为艾滋病的速度与感染早期的病毒控制有关。CD8+T细胞表现出的特异性反应对于建立早期、有效和持续的对病毒的控制，防止严重的免疫改变和器官功能障碍至关重要，包括由CD8 + T细胞应答介导，包括细胞毒性和非细胞毒性的抗病毒响应。

在之前的研究（丁清）中，证实了用广谱受体抑制剂vMIP-Ⅱ抑制了HIV共同受体时，特别是CXCR4，可以促进体内SIV感染的恒河猴中抗原特异性CD8 + T细胞亚群的克隆扩增，这可以有效抑制病毒复制并增强急性SIV期间的免疫应答，因此趋化因子受体如CXCR4或CCR5的抑制剂vMIP-Ⅱ可能有助于增强抗原特异性CD8 + T细胞的克隆扩增能力从而抑制SIV感染。

T淋巴细胞表面的CD4分子是HIV的受体，通过HIV的囊膜蛋白gp120与细胞膜上的CD4分子结合后，gp120构像改变使gp41暴露，同时gp120-CD4与靶细胞表面的趋化因子CXCR4或CXCR5结合形成CD4-gp120-CXCR4/CXCR5三分子复合物。gp41在其中起着桥的作用，利用自身的疏水作用介导病毒囊膜与细胞膜融合，最终造成细胞被破坏。在早先的另一项研究中（MHC-I限制性表达HIV-1病毒粒子抗原，无病毒复制），显示来自进入的病毒粒子的HIV-1表位通过原代人树突细胞中的外源MHC-I途径呈递，并且在较低程度上呈现在巨噬细胞中，导致在没有病毒蛋白质合成的情况下细胞毒性T淋巴细胞活化。提示了HIV外源抗原肽可以刺激特异性CD8+T细胞的激活和增殖。

根据上述研究，并且鉴于SIV和HIV的同源性，我们设计在SIV急性期，通过使用vMIP等受体抑制剂，观察vMIP-II是否可以促进HIV特异性CD8 + T细胞的克隆增生，从而达到在感染早期降低病毒设定点的目的，延缓病毒的进展。探讨vMIP抑制HIV感染的新机制。

发明内容

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

1.1动物及动物感染

1.2猴PBMC、血浆的制备、PBMC中DNA的抽提