[发明专利]一种高纯度替考拉宁的生产工艺

说明书

本发明提供了一种高纯度替考拉宁的生产工艺，包括如下步骤：1)配制斜面培养基、种子培养基和发酵培养基；2)发酵液的制备；3)洗脱液的制备；4)制得成品；本发明中Mg²⁺能够提高游动放线菌细胞葡萄糖氧化酶的活力，Fe³⁺对活菌的生长和芽孢的生成均有促进作用，Mg²⁺和Fe³⁺通过协同作用产生活性中心，有效的催化发酵的进行，提高了替考拉宁的产率。

技术领域

本发明涉及制药工程技术领域，具体涉及一种高纯度替考拉宁的生产工艺。

背景技术

替考拉宁，又名太古霉素，1975年被首次发现。它是特定的游动放线菌经发酵、提取后得到的一种万古霉素族糖肽类抗生素，为多个化学结构非常相似的化合物组成的抗生素混合物。

替考拉宁(teicoplanin)是比较有代表性的糖肽系列抗生素。临床上主要用于治疗金葡菌及链球菌属等敏感菌所致的严重感染，如心内膜炎、骨髓炎、败血症及呼吸道、泌尿道、皮肤、软组织等的感染。其抗菌机理在于该物质可以阻碍革兰氏阳性菌株细胞壁合成过程中肽聚糖合成中间体的相互结合，从而起到抑制上述细菌成长的作用。

在现有的替考拉宁生产方法中，一般采用替考游动放线菌作为替考拉宁的生产菌株，并需要对发酵获得的替考拉宁粗品进行纯化。在中国公开的专利文件CN104357520A中公开了一种可提高替考拉宁产量的替考拉宁的补料培养基及生产替考拉宁的方法，替考拉宁的补料培养基包括碳源、氮源和pH值调节剂中的一种或几种，碳源包括甘油、葡萄糖、淀粉、燕麦粉和乳糖中的一种或几种，氮源包括玉米蛋白粉、棉籽精粉、黄豆粉、蛋白胨和酵母粉中的一种或几种，pH值调节剂包括磷酸和氨水中的一种或两种，生产替考拉宁的方法具体为发酵过程中向发酵培养基添加补料培养基，补料培养基包括碳源、氮源和pH值调节剂中的一种或几种。该发明的有益效果在于，发酵过程中向发酵培养基中添加补料培养基，降低抑制产生替考拉宁次生代谢途径的因素，可提高替考拉宁发酵的产量。

但现有的替考拉宁生产工艺存在生产效率低，副产物多的缺陷。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种高纯度替考拉宁的生产工艺，有效的弥补了现有技术存在的缺陷。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种高纯度替考拉宁的生产工艺，包括如下步骤：

1)配制斜面培养基、种子培养基和发酵培养基；

其中，斜面培养基的配制方法为：按照重量份数称取可溶性淀粉5-8份、酵母膏0.5-1.5份、葡萄糖1-3份、琼脂粉2-4份、碳酸钙0.1-0.5份、乙酸0.2-1份、[Mg_2-2xFe_2x(OH)₄][SO₄]_x·mH₂O 2-4份配制斜面培养基，调节pH为6.8-7.0；

其中，种子培养基的配制方法为：按照重量份数称取可溶性淀粉7-10份、甘露醇3-5份、酵母粉3-6份、蛋白胨2-5份配制种子培养基，调节pH为7.2-7.4；

其中，发酵培养基的配制方法为：按照重量份数称取糊精1-3份、可溶性淀粉10-15份、黄豆粉2-5份、玉米浆6-10份、碳酸钙0.1-0.5份配制发酵培养基，调节pH为6.8-7.0；

2)刮取新鲜斜面接种到装有一定量种子培养基的250ml摇瓶中，在30℃条件下以200-210r/min的转速振荡培养4-5天，以8-10％接种量将游动放线菌接种到装有30-40ml发酵培养基的250ml三角瓶中，加入适量Diaion HP-20离子交换树脂，在30℃条件下以200-210r/min的转速振荡培养7-9天，得发酵液；