[发明专利]基于化学交联质谱解析的质膜蛋白质相互作用的鉴定方法

说明书

本发明涉及一种基于化学交联质谱解析的质膜蛋白质相互作用的鉴定方法，该方法首先通过在生物样品保持质膜结构存在下使用不透过质膜的化学交联试剂与质膜蛋白质发生化学交联反应，然后对质膜蛋白质进行还原、烷基化和酶解的样品预处理操作，进一步对肽段样品进行质谱鉴定和数据检索，从而实现基于化学交联质谱解析的质膜蛋白质相互作用的鉴定。本发明的优点是实验操作简单快速，可以实现质膜蛋白质相互作用的高效捕获，为研究质膜蛋白质的相互作用提供重要的技术支撑。

技术领域

本发明涉及一种基于化学交联质谱解析的质膜蛋白质相互作用的鉴定方法，利用不通过质膜的化学交联试剂与质膜蛋白质发生化学交联反应，然后对质膜蛋白质进行样品预处理，得到肽段样品进行质谱鉴定和数据解析，实现基于化学交联策略的质膜蛋白质复合体的分析，为研究质膜蛋白质的空间结构及质膜蛋白质相互作用网络提供重要的技术支撑。

背景技术

质膜是围绕在细胞最外层，由脂质和蛋白质组成的生物膜。质膜蛋白质作为质膜功能的主要体现者，具有信号传导，分子运输，细胞-细胞或细胞-基质间信息传递等重要生物功能(Wei,X；Song,H；Yin,L；Rizzo,M G；Sidhu,R；Covey,D F；Ory,D S；Semenkovich,CF.Nature.2016，539(7628):294-298；Lun,X K；Zanotelli,V R；Wade,J D；Schapiro,D；Tognetti,M；Dobberstein,N；Bodenmiller,B.Nat.Biotechnol.2017,35(2):164-172)。质膜蛋白质与癌症，阿尔兹海默及小儿麻痹症等多种疾病密切相关(Byun,D J；Wolchok,J D；Rosenberg,L M；Girotra,M.Nat.Rev.Endocrinol.2017；Leth-Larsen,R；Lund,R R；Ditzel,H J.Mol.Cell.Proteomics.2010,9(7):1369；Lukiw,W J.Front Physiol.2013,4:24；Madan,V；Sanchez-Martinez,S；Vedovato,N；Rispoli,G；Carrasco,L；Nieva,JL.J.Mol.Biol.2007,374(4):951-)；有超过60％的已知药物靶标为质膜蛋白质(Sant,D G；Tupe,S G；Ramana,C V；Deshpande,M V.J.Appl.Microbiol.2016,121(6):1498-1510；Boczek,T；Lisek,M；Ferenc,B；Zylinska,L.Biochem.Biophys.Res.Commun.2015,465(2):312-7；Damaghi,M；Tafreshi,N K；Lloyd,M C；Sprung,R；Estrella,V；Wojtkowiak,J W；Morse,D L；Koomen,J M；Bui,M M；Gatenby,R A；Gillies,R J.Nat.Commun.2015,6:8752.)。质膜蛋白质通过相互作用形成复杂的复合物，从而精密、有序地调控细胞膜的生命活动过程。对质膜蛋白质复合物的精细解析，绘制质膜蛋白质构象折叠变化及质膜蛋白质之间的相互作用网络，已成为当前生命科学的研究热点，对于理解复杂的生物膜系统、揭示疾病发生发展机制、筛选疾病相关的生物标志物，以及寻找药物的靶标具有重大意义。然而，由于质膜蛋白质丰度低，且缺乏可被特异反应的基团，因此难以对其相互作用展开全面深入的分析。