[发明专利]一种利拉鲁肽的分离提纯方法

权利要求书

1.一种利拉鲁肽的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括如下步骤：

1)将利拉鲁肽粗品溶解，过滤；

2)将步骤1)过滤后的利拉鲁肽溶液上样到装有反相填料的制备柱中进行第一步纯化和第二步纯化；

第一步纯化采用碱性流动相对目标产物进行洗脱纯化，分段收集目的峰值溶液，混合各段收集的溶液为合并组份液；

第二步纯化采用酸性流动相对合并组份液进行二次纯化，将步骤2)第一步的合并组份液上样到装有反相填料的制备柱中，分段收集目的峰值溶液，混合各段收集的溶液为合并组份液，得到纯化后的利拉鲁肽。

2.根据权利要求1所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述碱性流动相为含碱性调节剂的水溶液和有机溶剂；

优选地，所述碱性流动相的pH值为8.5～11。

3.根据权利要求2所述的分离纯化方法，其特征在于，所述碱性调节剂为三乙胺和/或氨水。

4.根据权利要求1-3之一所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述反相填料的型号是UniSil Lira系列的反相填料。

5.根据权利要求1-4之一所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述酸性流动相为含酸性调节剂的水溶液和有机溶剂；

优选地，所述酸性流动相的pH值为2～4。

6.根据权利要求5所述的分离纯化方法，其特征在于，所述酸性调节剂为甲酸、乙酸、三氟乙酸、磷酸、盐酸和高氯酸中的一种或至少两种的混合物。

7.根据权利要求2或5所述的分离纯化方法，其特征在于，所述有机溶剂为乙腈、甲醇、乙醇、丙酮和异丙醇中的一种或至少两种的混合物；

优选地，所述酸性流动相中的有机溶剂为乙腈和异丙醇的混合溶液；

优选地，所述乙腈和所述异丙醇体积比为(3～5):1。

8.根据权利要求1-7之一所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤2)中，所述第二步纯化过程为，先用含有0.1％三氟乙酸的乙腈水溶液平衡2～4个柱体积，泵上样完毕，再用含有0.1％三氟乙酸的乙腈水溶液冲洗1～2个柱体积，然后用酸性流动相洗脱主峰。

9.根据权利要求1-8之一所述的分离纯化方法，其特征在于，步骤1)中，所述利拉鲁肽粗品的纯度为50％以上。

10.根据权利要求1-9之一所述的分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括如下步骤：

1)将纯度为50％以上的利拉鲁肽粗品溶解，过滤；

2)将步骤1)过滤后的利拉鲁肽溶液上样到装有UniSil Lira微球的制备柱中进行第一步纯化和第二步纯化；

第一步纯化采用碱性流动相对目标产物进行洗脱纯化，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行合并，其中，所述碱性流动相为含氨水的水溶液和乙腈；

用含有0.1％三氟乙酸的乙腈水溶液平衡2～4个柱体积，将第一步合并组份液重新上样到装有UniSil Lira微球的制备柱中，泵上样完毕，再用含有0.1％三氟乙酸的乙腈水溶液冲洗1～2个柱体积；

第二步纯化采用酸性流动相对合并组份液进行二次纯化，其中，所述酸性流动相为含乙酸的水溶液及体积比为(3～5):1的乙腈和异丙醇的混合溶液，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，得到纯化后的利拉鲁肽。