[发明专利]一种利拉鲁肽的分离提纯方法

说明书

本发明提供了一种利拉鲁肽的分离纯化方法。该分离纯化方法包括如下步骤：1)将利拉鲁肽粗品溶解过滤；2)将过滤后的利拉鲁肽溶液上样到装有反相填料的制备柱中进行第一步纯化和第二步纯化；第一步纯化采用碱性流动相对目标产物进行洗脱纯化，分段收集目的峰值溶液，合并组份液；将合并组份液上样到装有反相填料的制备柱中，第二步纯化采用酸性流动相对合并组份液进行二次纯化，分段收集目的峰值溶液，合并组份液，得到利拉鲁肽。本发明通过两步纯化、仅需一种填料即可得到高纯度利拉鲁肽，第一步合并组份液可直接用于第二步纯化，无需稀释、浓缩、调节pH中间操作，纯化过程简便易行，可用于规模化生产，降低了生产成本，提高了生产效率。

技术领域

本发明属于胰岛素药物纯化技术领域，涉及一种利拉鲁肽的分离提纯方法，尤其涉及一种利拉鲁肽的高效分离提纯方法。

背景技术

利拉鲁肽是一种GLP-1类似物，与人GLP-1具有97％的序列同源性，人GLP-1可以结合并激活GLP-1受体。GLP-1受体为天然GLP-1的靶点，GLP-1是一种内源性肠促胰岛素激素，能够促进胰腺β细胞葡萄糖浓度依赖性地分泌胰岛素。与天然GLP-1不同的是，利拉鲁肽在人体中的药代动力学和药效动力学特点均适合每天一次的给药方案。皮下注射给药后，其作用时间延长的机理包括：使吸收减慢的自联作用；与白蛋白结合；对二肽基肽酶IV(DPP-IV)和中性内肽酶(NEP)具有更高的酶稳定性，从而具有较长的血浆半衰期。

利拉鲁肽的活性由其与GLP-1受体间特定的相互作用介导，导致环磷酸腺苷(cAMP)的增加。利拉鲁肽能够以葡萄糖浓度依赖的模式刺激胰岛素的分泌，同时以葡萄糖浓度依赖的模式降低过高的胰高糖素的分泌。因此，当血糖升高时，胰岛素分泌受到刺激，同时胰高糖素分泌受到抑制。与之相反，在低血糖时利拉鲁肽能够减少胰岛素分泌，且不影响胰高糖素的分泌。另外，利拉鲁肽的降血糖机理还包括轻微延长胃排空时间，利拉鲁肽能够通过减轻饥饿感和能量摄入降低体重和体脂量。

利拉鲁肽为三十一肽，氨基酸序列如下：

NH₂-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N-ε(N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl))-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-COOH。

目前，国内外专利、文献等对利拉鲁肽的报道主要为固相合成方法，分离纯化方法较少报道。

CN107880111A公开了一种制备利拉鲁肽的方法，包括通过Glu侧链羧基进行固相支载，合成氨基酸树脂Fmoc-Glu(Resin)-OAll；以Fmoc-Glu(Resin)-OAll为起始树脂合成肽树脂中间；偶联片段，制得利拉鲁肽肽树脂；利拉鲁肽肽树脂经酸性条件裂解、HPLC纯化、冷冻干燥后制得高纯度利拉鲁肽。该方法采用C18或C8填料进行多次纯化、转盐，最后冷冻干燥得到利拉鲁肽成品，该方法首次将固相树脂支载于利拉鲁肽21位Glu侧链羧基上进行利拉鲁肽肽树脂的固相法合成，使固相树脂载体处于肽链接近中部位置，增加了肽链与树脂间的柔性，使肽链更容易变形而降低反应位阻，从而提高合成反应效率，但是，该方法工序步骤多，导致操作复杂收率降低。