[发明专利]一种柱前衍生高效液相色谱-荧光检测器测定荞麦中D-荞麦碱的方法在审
申请号: | 201811408499.4 | 申请日: | 2018-11-23 |
公开(公告)号: | CN110632187A | 公开(公告)日: | 2019-12-31 |
发明(设计)人: | 王敏;朱瑞雪;韩林;王玉堂;方纯;彭强 | 申请(专利权)人: | 西北农林科技大学 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74 |
代理公司: | 11465 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) | 代理人: | 李冉 |
地址: | 712100 *** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 荞麦 荧光检测器 高效液相色谱仪 高效液相色谱 浓度标准曲线 乙酸水溶液 发射波长 激发波长 碱衍生物 水浴反应 衍生试剂 柱前衍生 进样量 流动相 色谱柱 外标法 乙腈 柱温 酰氯 绘制 记录 分析 | ||
本发明公开了一种柱前衍生高效液相色谱‑荧光检测器测定荞麦中D‑荞麦碱的方法。以芴甲氧酰氯为衍生试剂,pH=8.5、20℃水浴反应20min进行衍生。采用岛津LC‑20A高效液相色谱仪,RF‑20A荧光检测器;TIANHE Kromasil C18(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱;柱温为28℃;流动相为40:60(v/v)的乙腈:0.1%的乙酸水溶液;流速为1mL/min;激发波长为240nm,发射波长为315nm;分析时间为40min;进样量为10μL进行测定,并记录峰面积。采用外标法绘制D‑荞麦碱衍生物峰面积‑衍生物浓度标准曲线,进而计算得出样品中D‑荞麦碱的含量。
技术领域
本发明属于分析技术领域,具体涉及一种柱前衍生高效液相色谱-荧光检测器测定荞麦中D-荞麦碱的方法。
背景技术
D-荞麦碱(1,2-双脱氧野尻霉素)是一种六元环亚胺基环多醇,首次是从荞麦(荞麦,蓼科)种子里分离出来,也存在于其他植物如桑叶和枸杞中(Gómez L,2012)。亚胺基环多醇,也称为亚胺糖,是碳水化合物的类似物,即碳水化合物的内环氧被氮取代,羟基的空间构型和糖(如,葡萄糖)一样,化学结构如下(Gómez L,2012)。
D-荞麦碱是肠道糖苷酶的抑制剂,可以调节餐后血糖浓度。因此,可以降低胰岛素抵抗和超重的风险(Amézqueta S,2013)。最近研究表明,D-荞麦碱在肠道运输中发挥着双重作用:首先,D-荞麦碱有效地延缓蔗糖和淀粉的分解,从而降低血糖浓度;其次,D-荞麦碱选择性的凝集肠杆菌科,如大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌,促进益生菌粘附到肠粘膜 (Amézqueta S,2013)。
由于D-荞麦碱没有发色团,不能用简单的分光光度法测定其含量,所以要寻找其他的检测方法。有文献表明,气相色谱(GC)可以用于分离亚胺糖混合物,但是因为亚胺糖没有挥发性,所以需要先形成稳定的挥发性衍生物(Amézqueta S,2016);在检测器的选择上,脉冲安培检测器-阴离子交换液相色谱也用于亚胺糖的检测,但是该技术的灵敏性和重现性较差(Amézqueta S,2016);蒸发光散射检测器(ELSD)是一种检测糖的半通用检测器,应该也适用于亚胺糖的检测,但是ELSD需要很细致的样品前处理以避免干扰且 ELSD-HPLC是在等度条件下分离、系统温度需要准确控制(Amézqueta S,2016);在亚胺糖分析中,质谱(MS)是应用最广泛的检测方法,但是,该方法成本较高,而且所需的氨基柱也比较昂贵,一般实验室并不具备(Amézqueta S,2012)。所以,建立一种快速简单的测定方法是很必要的。而HPLC-UV和HPLC-FLD已经应用于分析衍生之后的亚胺糖,经 9-芴(Fmoc)衍生之后,可以用反相C18色谱柱检测桑叶中的DNJ(Amézqueta S,2016)。基于对各种亚胺糖检测方法的比较,最终选择建立一种利用芴甲氧酰氯柱前衍生液相色谱- 荧光检测器的方法。
本发明的目的是针对现有技术存在的不足和缺陷。借助柱前衍生高效液相色谱-荧光检测器,建立一种D-荞麦碱的检测方法。本发明所提供的检测方法是通过柱前衍生高效液相色谱-荧光检测器法实现的,旨在解决现有方法大都依赖于高端分析检测仪器,检测成本高,方法难以普及应用的问题。
Amézqueta S,Galán E,Vila-Fernández I,et al.The presence of D-fagominein the human diet from buckwheat-based foodstuffs[J].Food chemistry,2013, 136(3):1316-1321.
Amézqueta S,Torres J L.Advances in the analysis of iminocyclitols:Methods,sources and bioavailability[J].Talanta,2016,151:157-171.
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