[发明专利]外周血CIK细胞改良的培养方法有效
| 申请号： | 201811409221.9 | 申请日： | 2018-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN109337869B | 公开（公告）日： | 2019-11-05 |
| 发明（设计）人： | 张权 | 申请（专利权）人： | 见多视光(北京)科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 苏胜 |
| 地址： | 100000 北京市海*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 培养体系 外周血 细胞因子 改良 细胞 扩增效果 培养容器 包被 补加 换液 活化 接种 收获 | ||
1.一种外周血CIK细胞改良的培养方法，其特征在于，包括：
1)将由外周血分离得到的PBMC接种于包被有CD3抗体及CD28抗体的培养容器中进行培养；培养体系中的细胞因子为IFN-γ900U/mL～1100U/mL；
2)向培养体系中加入IL-2终浓度为900U/mL～1100U/mL，IL-12终浓度为2ng/mL～3ng/mL，IL-15终浓度为8ng/mL～12ng/mL，CD16抗体终浓度为1.5μg/mL～2.5μg/mL；
3)换液，新的培养体系中的细胞因子为IL-2 900U/mL～1100U/mL；
4)补加IL-2 45～55万IU/400ml，培养2～4天后收获细胞。
2.根据权利要求1所述的外周血CIK细胞的培养方法，其特征在于，在步骤1)中，所述培养容器包被有CD3抗体及CD28抗体的方法为：
以所述培养面积为25cm2计，加入2.5～3.5mL含有CD3抗体400ng/mL～600ng/mL及CD28抗体400ng/mL～600ng/mL的包被液，在细胞培养条件下包被1.5h～2.5h。
3.根据权利要求2所述的外周血CIK细胞改良的培养方法，其特征在于，所述包被液的溶剂为D-PBS。
4.根据权利要求1所述的外周血CIK细胞改良的培养方法，其特征在于，在步骤1)中，所述培养体系中的基础培养基为含4％～6％自体血浆的VIVO培养基。
5.根据权利要求4所述的外周血CIK细胞改良的培养方法，其特征在于，在步骤1)中，以所述培养面积为25cm2计，培养基的加入量为8ml～12ml，细胞接种量为0.8×107～1.2×107。
6.根据权利要求5所述的外周血CIK细胞改良的培养方法，其特征在于，步骤1)的培养时间为20h～28h。
7.根据权利要求1所述的外周血CIK细胞改良的培养方法，其特征在于，步骤2)的培养时间为2d～4d。
8.根据权利要求1所述的外周血CIK细胞改良的培养方法，其特征在于，在步骤3)中，所述培养体系中的基础培养基为含4％～6％自体血浆的GT-T581培养基。
9.根据权利要求8所述的外周血CIK细胞改良的培养方法，其特征在于，步骤3)具体包括：
a)以培养面积为75cm2计，加入15～25ml培养基培养3d；
b)换液，以培养面积为175cm2计，加入60ml～80ml培养基培养3d；
c)换液，使用培养袋进行培养，加入300ml～400ml培养基培养3d。
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