[发明专利]外周血CIK细胞改良的培养方法

说明书

本发明涉及一种外周血CIK细胞改良的培养方法。该方法包括：1)将由外周血分离得到的PBMC接种于包被有CD3抗体及CD28抗体的培养容器中进行培养；培养体系中的细胞因子为IFN‑γ；2)向培养体系中加入IL‑2，IL‑12，IL‑15，CD16抗体；3)换液，新的培养体系中的细胞因子为IL‑2；4)补加IL‑2，培养2～4天后收获细胞。该方法CIK扩增效果好，且活化的CIK占比更高、T‑reg细胞占比更低。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，涉及一种外周血CIK细胞改良的培养方法。

背景技术

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells，CIK)是一群在体外经IL-1α、IL-2、IFN-γ及抗CD3单克隆抗体等诱导而成的以CD3+CD56+细胞为主的CD4+和CD8+效应T细胞群，兼具有T细胞强大的杀瘤活性以及NK细胞的非主要组织相容性复合体(MHC)限制性杀瘤的优点。

与其他过继免疫治疗细胞相比，CIK具有增殖速度快、杀伤活性高、杀瘤谱广以及副作用小等特点，对正常骨髓造血功能影响甚微，被临床认为是一种有效的肿瘤免疫治疗手段。广泛应用于肾癌、黑色素瘤、肝癌、胃癌和白血病等多种恶性肿瘤的治疗。

CIK可通过多种途径发挥抗肿瘤作用。CIK对肿瘤细胞有直接杀伤作用，通过分泌颗粒酶和穿孔素穿透靶细胞膜，直接导致肿瘤细胞破裂；CIK具有较强的细胞毒活性，可分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α和GM-CSF等多种细胞因子进一步提高免疫效应细胞的细胞毒作用，不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用，还可通过调节免疫系统间接杀伤瘤细胞，诱导肿瘤细胞凋亡。现有技术中的外周血CIK培育方法，普遍存在扩增倍率低、细胞活性差等问题。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新颖的外周血细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells，CIK)的培养方法，该方法操作简单，培养得到CIK质量较好，可用于CIK的大量制备，使该方法更利于推广和应用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明涉及一种外周血CIK细胞改良的培养方法，包括：

1)将由外周血分离得到的PBMC接种于包被有CD3抗体及CD28抗体的培养容器中进行培养；培养体系中的细胞因子为IFN-γ 900U/mL～1100U/mL；

2)向培养体系中加入IL-2终浓度为900U/mL～1100U/mL，IL-12终浓度为2ng/mL～3ng/mL，IL-15终浓度为8ng/mL～12ng/mL，CD16抗体终浓度为1.5μg/mL～2.5μg/mL；

3)换液，新的培养体系中的细胞因子为IL-2 900U/mL～1100U/mL；

4)补加IL-2 45～55万IU/400ml，培养2～4天后收获细胞。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

CIK扩增效果好，且活化的CIK占比更高、T-reg细胞占比更低。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为对本发明一个实施例培养得到的CIK细胞表面标志物进行检测的结果。

具体实施方式

本发明涉及一种外周血CIK细胞改良的培养方法，包括：