[发明专利]一种脐带间充质干细胞分离方法有效
| 申请号： | 201811409243.5 | 申请日： | 2018-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN109337867B | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 刘年 | 申请（专利权）人： | 北京太东生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 李进 |
| 地址： | 100000 北京市丰*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 组织块 脐带间充质干细胞 组织块法 细胞 胶原酶消化 消化 高效分离 细胞分离 细胞状态 胰酶消化 原代培养 脐带剪 清洗 生长 | ||
1.一种脐带间充质干细胞分离方法，其特征在于，包括：
将清理后的脐带剪成8mm3～64mm3大小的组织块后，依次用1.1g/L～1.4g/L胰酶消化10min～30min，0.06wt％～0.09wt％胶原酶消化40min～80min；
将消化完成的组织块清洗后进行培养。
2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞分离方法，其特征在于，脐带的清理方法为：
无菌条件下剥离脐带外膜，去除脐动脉和脐静脉，清洗除去残余血液和其他杂质。
3.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞分离方法，其特征在于，胰酶消化过程在36℃～38℃下，通过将脐带静置浸泡进行。
4.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞分离方法，其特征在于，胶原酶消化过程在36℃～38℃下，震荡中进行。
5.根据权利要求1或4所述的脐带间充质干细胞分离方法，其特征在于，所述胶原酶为II型胶原酶。
6.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞分离方法，其特征在于，所述消化完成的组织块清洗的方法包括：
a)900rpm～1100rpm离心3min～7min；
b)弃去上清液，沉淀重悬后900rpm～1100rpm离心3min～7min。
7.根据权利要求6所述的脐带间充质干细胞分离方法，其特征在于，重复步骤b)一次或多次。
8.根据权利要求6或7所述的脐带间充质干细胞分离方法，其特征在于，沉淀重悬所用的溶液为含8％～12％FBS的α-MEM培养基。
9.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞分离方法，其特征在于，所述培养所采用的培养基中含有0.8w/v％～1.2w/v％谷氨酰胺、bFGF15～25ng/mL，EGF 15～25ng/mL。
10.根据权利要求9所述的脐带间充质干细胞分离方法，其特征在于，所述培养基中的基础成分为含8％～12％FBS的α-MEM培养基。
11.根据权利要求9或10所述的脐带间充质干细胞分离方法，其特征在于，在进行所述培养时，使组织块半浸泡于培养基中，于36℃～38℃下培养。
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