[发明专利]一种脐带间充质干细胞分离方法

说明书

本发明涉及细胞分离培养技术领域，具体而言，涉及一种脐带间充质干细胞分离方法，该方法包括：将清理后的脐带剪成8mm³～64mm³大小的组织块后，依次用1.1g/L～1.4g/L胰酶消化10min～30min，0.06wt％～0.09wt％胶原酶消化40min～80min；将消化完成的组织块清洗后进行培养。本发明所提供的方法综合了组织块法和消化法二者的优点，能快速高效分离MSC，原代培养时间大大缩短，培养第3～4天即可看到细胞从组织块中爬出，细胞爬出时间较单纯组织块法大大缩短。且爬出的细胞非常多，细胞状态良好，生长速度非常快。

技术领域

本发明涉及细胞分离培养技术领域，具体而言，涉及一种脐带间充质干细胞分离方法。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是中胚层来源的、具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞。事实上，MSC广泛存在于全身多种组织中，几乎来源于机体所有的组织器官，如骨髓、骨膜、脂肪组织、牙髓、滑膜、脐带、胎盘、羊水及胎儿组织等。不同来源的间充质干细胞具有相似的形态，表达相同的表面标记，具有相似的生物学特性方面，如可在体外培养扩增，并能在特定条件下分化为包括神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞在内的多组织系统的细胞。MSC除了具有多向组织细胞分化能力之外，还在造血、免疫炎症反应、血管新生等人体重要功能中起重要调节作用。

脐带间充质干细胞是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞。脐带间充质是一类低免疫原性细胞，且具有很强的免疫调节功能。脐带间充质干细胞拥有MSC的全部特性，并且含量丰富，易于分离培养。

与其他来源的MSC相比，UC-MSC更原始，是介于胚胎干细胞和成体干细胞之间的干细胞，其增殖和分化能力比胚胎干细胞低，但明显高于成体干细胞。

脐带间充质干细胞具有多分化潜能，在特定的诱导条件下，UC-MSC不仅能分化为骨、软骨、脂肪、肌腱等中胚层细胞，而且能够向内胚层组织细胞(如心肌细胞、肝细胞)和外胚层组织细胞(如神经细胞)分化。UC-MSC不具致瘤性，能在不同的诱导条件及合适的体内生长微环境中，安全地定向分化为不同的组织细胞系，具有修复各种组织和器官的能力。

人脐带是一种胶状的结缔组织，如何高效地从脐带中分离脐带间充质干细胞是一直以来的难题。原代脐带间充质干细胞的最常见分离方法包括酶消化法和组织块培养法。酶消化培养法的经济成本高，通常需要使用专用的消化设备，消化设备比较昂贵。消化时间时间很长，一般4～5h，且消化程度不易把控，消化不够，无法得到足够数量的细胞，消化时间过久，使用的酶对细胞的损伤太大，细胞会大量死亡。且由于消化液为黏稠液体，离心时不易分离出细胞。组织块培养法过程简便易行，且经济成本低，但原代培养时间太长，通常需要14～20d才能够得到数量不多的原代细胞。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的主要目的是结合使用酶消化法和组织块法，优化脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)的分离方法，提高分离效率和细胞数量。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明涉及一种脐带间充质干细胞分离方法，包括：

将清理后的脐带剪成8mm³～64mm³大小的组织块后，依次用1.1g/L～1.4g/L胰酶消化10min～30min，0.06wt％～0.09wt％胶原酶消化40min～80min；

将消化完成的组织块清洗后进行培养。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：