[发明专利]外周血来源的树突状细胞培养方法

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，涉及一种外周血来源的树突状细胞培养方法，所述方法包括如下步骤：1)将从外周血中分离得到的PBMC细胞使用培养基A培养，得到离体未成熟树突状细胞；2)将所述离体未成熟树突状细胞在培养基B中培养，得到成熟树突状细胞；其中，所述培养基A为额外添加包括下列成分的AIM‑V培养基：0.8～1.2v/v％自体血浆、GM‑CSF 40～60ng/mL、IL‑4 40～60ng/mL；所述培养基B为在所述培养基A的基础上额外添加TNF‑α7～13ng/mL以及PEG‑2 0.8～1.2μg/mL。本发明通过优化培养流程，筛选和优化诱导成熟因子组分，大大提高了成熟DC细胞的比例，提高了细胞质量，还能降低培养成本。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，涉及一种外周血来源的树突状细胞培养方法。

背景技术

树突状细胞(Dendritic cells，DCs)是体内最有效的抗原提呈细胞，表面表达B7、MHC-Ⅱ类分子、ICAM-1等多种共刺激分子，激活辅助T细胞，促使其分泌IL-2等细胞因子，传递特异性抗原信号，最终活化细胞毒性T细胞，因此DC细胞在体内起到启动一系列免疫反应的关键作用，在机体的免疫功能以及肿瘤的免疫治理中有重要意义。

大多数DC细胞来源于骨髓，由骨髓进入外周血，再分布到全身各组织中，DC广泛分布于除脑以外的全身各脏器，但数量极少，仅占外周血单个核细胞的1％以下。DC前体细胞随血液分布到肠道、心、肝等各非淋巴器官后，发育为未成熟DC细胞。此时，DC细胞具有较强的抗原摄取加工能力，而激活T细胞的能力低下。处于各种非淋巴组织中的未成熟DC细胞摄取抗原后，到达淋巴结、脾脏，此后DC细胞摄取抗原加工的能力减弱直至消失，而致敏T淋巴细胞、启动免疫反应的能力增强，成为成熟DC细胞。

在体外培养淋巴细胞的过程中，为了最大程度活化T细胞，需要加入成熟的DC细胞以致敏T细胞。DC细胞的体外培养，通常以外周血单个核细胞作为前体细胞诱导未成熟的DC的细胞。DC细胞促成熟过程非常复杂，涉及到多种因子的共同作用，诸如GM-CSF、TNF、IL-6、IL-4、IL-1β、PGE2、polyI:C、CD40L等等。

成熟的DC细胞高表达MHC-I、MHC-Ⅱ类分子，以及CD80、CD86、CD40和ICAM-1等免疫分子，能够与T淋巴细胞之间的黏附分子及配体相互作用，从而激活T淋巴细胞。但DC细胞诱导成熟过程复杂，现诱导技术成熟DC细胞比例较低，因而不能有效活化T淋巴细胞。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新颖的外周血来源的树突状细胞培养方法，该方法操作简单，培养得到树突状细胞(Dendritic cells，DCs)质量较好，可用于树突状细胞的大量制备，使该制备方法更利于推广和应用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明涉及一种外周血来源的树突状细胞培养方法，包括如下步骤：

1)将从外周血中分离得到的PBMC细胞使用培养基A培养，得到离体未成熟树突状细胞；

2)将所述离体未成熟树突状细胞在培养基B中培养，得到成熟树突状细胞；

其中，所述培养基A为额外添加包括下列成分的AIM-V培养基：0.8～1.2％自体血浆、GM-CSF 40～60ng/mL、IL-4 40～60ng/mL；

所述培养基B为在所述培养基A的基础上额外添加TNF-α7～13ng/mL以及PEG-20.8～1.2μg/mL。

本发明通过两步培养，能更好地诱导DC细胞成熟，所得到的DC细胞质量高，完全超出临床使用标准。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：