[发明专利]诱导脐带间充质干细胞成软骨分化的培养方法，以及该方法所用的培养基在审
| 申请号： | 201811409257.7 | 申请日： | 2018-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN109456939A | 公开（公告）日： | 2019-03-12 |
| 发明（设计）人： | 刘年 | 申请（专利权）人： | 北京太东生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077;C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 邓超 |
| 地址： | 100000 北京市丰*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 诱导 软骨 分化 脐带间充质干细胞 密实 软骨细胞 培养基 间充质干细胞 基础培养基 抗坏血酸酯 特异性染色 丙酮酸钠 地塞米松 细胞诱导 分化率 脯氨酸 小球 接种 质地 搭配 优化 | ||
1.一种诱导脐带间充质干细胞成软骨分化的培养基，其特征在于，其由基础培养基中至少额外添加如下组分得到：
TGF-β3 7～13ng/mL、地塞米松0.07～0.13μmol/L、抗坏血酸酯40～60μg/mL、1×ITS0.7～1.3w/v％、L-脯氨酸30～50μg/mL以及丙酮酸钠0.7～1.3mmol/L。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，其由基础培养基中至少额外添加如下组分得到：
TGF-β3 8～12ng/mL、地塞米松0.08～0.12μmol/L、抗坏血酸酯45～55μg/mL、1×ITS0.8～1.2w/v％、L-脯氨酸35～45μg/mL以及丙酮酸钠0.8～1.2mmol/L。
3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，其由基础培养基中至少额外添加如下组分得到：
TGF-β3 10ng/mL、地塞米松0.1μmol/L、抗坏血酸酯50μg/mL、1×ITS 1w/v％、L-脯氨酸40μg/mL以及丙酮酸钠1mmol/L。
4.根据权利要求1～3任一项所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM高糖培养基。
5.一种诱导脐带间充质干细胞成软骨分化方法，其特征在于，包括：
使用权利要求1～4任一项所述的培养基培养脐带间充质干细胞。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，用于接种的脐带间充质干细胞为P3～P5代，细胞汇合度为70％～80％且状态良好的细胞经消化后收集得到。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述消化所采用的胰酶浓度为0.20％～0.30％。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在消化完成，清洗细胞后，将细胞移至透气尖底细胞培养管中，离心后去除上层液体。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在培养时，细胞的接种量为每500μL培养基接种(1～9)×105个细胞。
10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养的时间为13～15天；优选的，从第7天开始，每2～4天换液一次。
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