[发明专利]一种细胞转染的蛋白质载体

权利要求书

1.一种细胞转染的蛋白质载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将壳聚糖与邻苯二甲酸酐分散于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，于氩气气氛下搅拌并加热反应制备得到N-邻苯二甲酰-壳聚糖(NP-Chi)；

(2)将步骤(1)中反应产物N-邻苯二甲酰-壳聚糖溶于二甲基亚砜(DMSO)中，加入2-溴异丁酰溴和三乙胺，于室温下搅拌反应得到N-邻苯二甲酰-壳聚糖ATRP大分子引发剂(NP-Chi-Br)；

(3)将步骤(2)中反应产物NP-Chi-Br溶于N-甲基吡咯烷酮(NMP)中，加入肼一水合物(hydrazine monohydrate)溶液，在氩气气氛下搅拌并加热反应得到壳聚糖ATRP大分子引发剂(Chi-Br)；

(4)将步骤(3)中产物Chi-Br和2-甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱(MPC)溶于DMSO中，于氮气保护下加入溴化亚铜(CuBr)和联吡啶(bpy)，室温下搅拌反应后得到产物壳聚糖与聚(2-甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱)接枝物(Chi-PMPC)。

2.根据权利要求1所述的细胞转染蛋白质载体的制备方法，其特征在于，步骤(1)中壳聚糖与邻苯二甲酸酐的质量比为1:2～5，DMF体积为20～80体积份，加热温度为110～130℃，反应时间4h～16h，反应完成后冷却至室温，倒入冰水中，抽滤得到沉淀并用冰甲醇彻底洗涤，干燥后得到N-邻苯二甲酰-壳聚糖(NP-Chi)。

3.根据权利要求1所述的细胞转染蛋白质载体的制备方法，其特征在于，步骤(2)中NP-Chi在溶剂DMSO中的浓度为5.0质量份/20～80体积份，2-溴异丁酰溴1体积份，三乙胺1.1体积份，反应时间2～5d，反应完成后透析3～7d，过滤洗涤干燥后得黄色固体产物N-邻苯二甲酰-壳聚糖ATRP大分子引发剂(NP-Chi-Br)。

4.根据权利要求1所述的细胞转染蛋白质载体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中NP-Chi-Br在溶剂NMP中的浓度为1.0质量份/10～30体积份，肼一水合物溶液的浓度为4mol/L，体积为10～30体积份，加热温度90～110℃，反应3～8h后倒入乙醇中沉淀，离心分离沉淀，用乙醇洗涤后冻干得到壳聚糖ATRP大分子引发剂(Chi-Br)。

5.根据权利要求1所述的细胞转染蛋白质载体的制备方法，其特征在于，步骤(4)中Chi-Br与MPC的质量比为1:0.1～1，DMSO体积为20～50体积份，CuBr为0.05质量份，bpy为0.06质量份，反应16～48h后透析3～7d，冻干得产物壳聚糖与聚(2-甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱)接枝物(Chi-PMPC)。

6.一种细胞转染的蛋白质载体，其特征在于，其由权利要求1至5任一项所述的细胞转染蛋白质载体的制备方法制得。