[发明专利]一种细胞转染的蛋白质载体

说明书

本发明公开了一种细胞转染的蛋白质载体的制备。所述制备方法为：首先利用邻苯二甲酸酐与壳聚糖反应，将氨基保护，再将其与2‑溴异丁酰溴反应，得到ATRP大分子引发剂，并将邻苯二甲酰胺基团脱去，得到Chi‑Br大分子引发剂，最后通过ATRP可控聚合反应，得到壳聚糖与聚(2‑甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱)接枝物(Chi‑PMPC)，即可用作蛋白质转染载体。本发明所使用的主题材料壳聚糖为天然多糖类物质，同时接枝的聚(2‑甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱)也是具有仿红细胞外表面细胞膜的脂质层结构的特点，因而制备的壳聚糖与聚(2‑甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱)接枝物具有很好的生物相容性和材料稳定性。

技术领域

本发明涉及生物材料领域，特别涉及一种细胞转染的蛋白质载体。

背景技术

蛋白质转染是指把蛋白质转入细胞的过程，一般需借助载体帮助目标蛋白转染进入细胞。目前关于基因载体的研究较多，而蛋白质载体却鲜有关注。目前已有报道的几种蛋白质载体如聚苯乙烯微球、阳离子脂质体试剂、多聚精氨酸、聚乙酰亚胺等均存在毒性较高或转染效率有限的问题，因此，需要构建一种同时具备安全低毒和高效转染特性的蛋白质载体。

发明内容

为了克服现有技术的不足与缺点，本发明目的在于提供一种蛋白质转染载体制备方法。其具有作为蛋白质转染载体有很好的生物相容性、血液相容性和材料稳定性的优点。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种细胞转染的蛋白质载体的制备方法，包括以下步骤：

(1)N-邻苯二甲酰-壳聚糖(NP-Chi)的制备：将壳聚糖与邻苯二甲酸酐分散于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，于氩气气氛下搅拌并加热反应制备得到N-邻苯二甲酰-壳聚糖。

(2)N-邻苯二甲酰-壳聚糖ATRP大分子引发剂(NP-Chi-Br)的制备：将步骤(1)中反应产物N-邻苯二甲酰-壳聚糖溶于二甲基亚砜(DMSO)中，加入2-溴异丁酰溴和三乙胺，于室温下搅拌反应得到NP-Chi-Br产物。

(3)壳聚糖ATRP大分子引发剂(Chi-Br)的制备：将步骤(2)中反应产物NP-Chi-Br溶于N-甲基吡咯烷酮(NMP)中，加入肼一水合物(hydrazine monohydrate)溶液，在氩气气氛下搅拌并加热反应得到Chi-Br产物。

(4)壳聚糖与聚(2-甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱)接枝物(Chi-PMPC)的制备：将步骤(3)中产物Chi-Br和2-甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱(MPC)溶于DMSO中，于氮气保护下加入溴化亚铜(CuBr)和联吡啶(bpy)，室温下搅拌反应后得到产物Chi-PMPC。

步骤(1)中壳聚糖组分可替换为阳离子功能化或靶向功能化的壳聚糖衍生物，包括PEI改性壳聚糖衍生物、精氨酸改性壳聚糖衍生物、聚赖氨酸改性壳聚糖衍生物、树枝状聚赖氨酸改性壳聚糖衍生物、树枝状聚酰胺-胺改性壳聚糖衍生物、核靶向肽改性壳聚糖衍生物等。

步骤(1)中N-邻苯二甲酰-壳聚糖(NP-Chi)的制备可优选为以下步骤：将1.0质量份壳聚糖与2～5质量份邻苯二甲酸酐分散于20～80体积份DMF中，于氩气气氛下搅拌并加热至110～130℃。反应4h～16h后冷却至室温，倒入冰水中，抽滤得到沉淀并用冰甲醇彻底洗涤，干燥得到NP-Chi。

步骤(2)中N-邻苯二甲酰-壳聚糖ATRP大分子引发剂(NP-Chi-Br)的制备可优选为以下步骤：将5.0质量份步骤(1)中反应产物NP-Chi溶于20～80体积份DMSO中，加入1体积份2-溴异丁酰溴和1.1体积份三乙胺，于室温下搅拌反应2～5d得到过滤洗涤干燥后得黄色固体产物NP-Chi-Br。