[发明专利]合成核酸药物偶联物的方法

说明书

本发明涉及合成核酸适体药物复合物的方法。具体地，本发明通过固相合成，在引物的5’末端定点、定量的引入药物分子，可以实现一种到多种药物分子的连接。通过对模板(如核酸适体)和带有药物分子的引物进行扩增反应(如PCR)，可以大批量合成核酸适体药物复合物。由于引物较短，易于合成和分离，因此产率高、成本低，批次间差异小，可控性高。

技术领域

本发明属于生物药物技术领域，具体涉及合成核酸药物偶联物的方法。

背景技术

核酸适体与药物复合物的连接当前已报道的有多种方法。其中应用较多的是共价连接。

2009年Tan课题组实现了药物Dox与核酸适体sgc8的共价连接，并对其活性进行了考查，发现其能很好的靶向并特异性杀死核酸适体sgc8的靶细胞CEM，而对NB4细胞的活性没有影响。

2016年Rossi课题组用靶向胰腺癌的核酸适体P19分别与gemcitabine、5FdCMP、MMAE、DM1通过共价连接方式构建为核酸适体药物复合物，实现了靶向药物运输及胰腺癌的靶向治疗。

核酸适体与药物也可以通过非共价组装的方式进行连接，2006年John课题组通过将药物Dox嵌入核酸适体A10，实现了药物的靶向运输。

2015年Tan课题组通过构建Nano-train的方式在核酸适体sgc8中装载多个Dox，实现了靶向药物运输。

此外，通过纳米材料载体，结合aptamer的靶向性也可以实现药物的靶向运送。

2015年Li课题组通过纳米颗粒修饰核酸适体，装载光动力学治疗的药物，用于肿瘤的光动力学治疗。

2018年song课题组通过脂质体与核酸适体构建纳米载体装在药物Dox，用于乳腺癌的靶向治疗。

上述连接方式反应复杂，产率较低且可控性差。通过共价连接的方法，通常只能在核酸适体的一端引入一个药物分子，且反应相对复杂，产率不高。而非共价嵌入的方式，药物分子容易脱落，药物分子的个数不能控制。通过纳米载体的方式，需要制备纳米载体，修饰核酸适体，反应复杂，包裹药物分子的比例和效率也不可控。

2014年Tan课题组通过固相合成反应将药物5FdU连接至核酸适体sgc8上，实现了在核酸适体上定点引入特定数目的药物分子的方法，实现了药物的靶向可控运输。但固相合成本身受限于DNA长度，随着DNA长度的增加，合成效率降低，合成成本增加。通过固相合成法不利于合成长链的或双特异的Aptamer，因为合成产率低、成本相对高。

因此，本领域亟需开发合成产率高、成本低、可控性好地制备核酸适体药物复合物的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种合成产率高、成本低、可控性好地制备核酸适体药物复合物的方法。

本发明的第一方面，提供了一种制备核酸药物偶联物的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供第一引物，所述第一引物的结构如式I所示，

(X1)_n-X2 (I)，

式中，“-”为化学键或连接元件，

X1为药物分子，

X2为匹配区，所述匹配区与待扩增的核酸完全互补，

n为≥1的正整数；

(b)在一扩增体系中，以所述待扩增的核酸为模板，用所述的第一引物进行核酸扩增，从而获得核酸扩增产物；以及任选地

(c)对步骤(b)中所述的核酸扩增产物，除去反义链，得到所述的核酸药物偶联物。