[发明专利]一种检测试剂盒及其制备方法和肌钙蛋白T的检测方法

权利要求书

1.一种检测试剂盒，其特征在于，包括：磁分离试剂和酶标试剂；

磁分离试剂，包括：肌钙蛋白T抗体包被的金磁微粒；或，包括：链霉亲和素包被的金磁微粒以及生物素标记的肌钙蛋白T抗体；其中，所述金磁微粒为以氧化铁为核表面包覆修饰有纳米金颗粒的磁性复合微粒；所述金磁微粒的粒径为0.1～2μm；所述金磁微粒和肌钙蛋白T抗体的质量比为(10～1000):1；或，在所述链霉亲和素包被的金磁微粒中，所述金磁微粒与所述链霉亲和素的质量比为1:(10～1000)；在所述生物素标记的肌钙蛋白T抗体中，所述生物素与所述肌钙蛋白T抗体的质量比为10:(1～100)；

酶标试剂，包括：酶标抗体聚合物；所述酶标抗体聚合物包括：酶标抗体至少两个，以及碳桥；所述碳桥联接任意两个或以上、相邻或不相邻的所述酶标抗体，且所述碳桥上具有用于联接所述酶标抗体的联接位点，所述联接位点至少两个；所述酶标抗体包括检测抗体和偶联于所述检测抗体的标记酶，所述联接位点联接所述检测抗体和/或所述标记酶；其中，一分子酶标抗体聚合物中的酶标抗体的个数为2～10个；

所述酶标试剂中还包括：第一试剂，所述第一试剂含有丝胶蛋白；

在所述第一试剂中，所述丝胶蛋白的重量百分比含量为0.05％～5％；

所述丝胶蛋白的分子量为10000-50000Da，基本区重复2-8次，氨基酸序列共38个碱基，具体为：gsrksggssshedssksrdenvsttgsssntdsnsssv；

其中，所述检测试剂盒还包括：化学发光底物，所述酶标抗体聚合物中的标记酶与所述化学发光底物相互作用时，所述标记酶直接或间接催化所述化学发光底物发生反应，进而发射光子；

APS-5和AMPPD均属于酶促化学发光底物，当所述化学发光底物微APS-5和AMPPD时，工作浓度为1～300ug/mL；

当酶标抗体聚合物中的标记酶为辣根碱过氧化物酶时，所述化学发光底物为鲁米诺；当所述化学发光底物为鲁米诺时，工作浓度为1～300ug/mL。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述标记酶为碱性磷酸酶或辣根碱过氧化物酶；和/或

所述碳桥为直链的碳链结构或支链的碳链结构，且所述联接位点位于所述碳桥的端部；和/或

所述碳桥通过所述联接位点以酰胺键与所述肌钙蛋白T抗体和/或所述标记酶联接。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体聚合物与所述第一试剂混合，且所述酶标抗体聚合物的浓度为0.01～5ug/mL。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂包括：丝胶蛋白、氯化镁、氯化锌、防腐剂和缓冲液；或，丝胶蛋白、牛血清白蛋白、防腐剂和缓冲液；

所述第一试剂中，所述丝胶蛋白的质量百分比含量为0.05％～5％；所述氯化镁的工作浓度为4～6mM；所述氯化锌的工作浓度为0.5～1.5mM；所述防腐剂的质量百分比含量为0.05％～1％；所述牛血清白蛋白百分比含量为0.05％～5％。

5.权利要求1至4任一项所述的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：

S011、提供金磁微粒和肌钙蛋白T抗体，将所述肌钙蛋白T抗体与所述金磁微粒反应，制备肌钙蛋白T抗体包被的金磁微粒；

或，提供金磁微粒、链霉亲和素、生物素和肌钙蛋白T抗体，将所述链霉亲和素与所述金磁微粒反应，制备链霉亲和素包被的金磁微粒；将所述生物素与所述肌钙蛋白T抗体反应，制备生物素标记的肌钙蛋白T抗体；

S012、提供肌钙蛋白T抗体和标记酶，将所述肌钙蛋白T抗体和所述标记酶进行反应，得到酶标抗体；提供交联试剂，将所述交联试剂与所述酶标抗体在溶液中进行反应，制备酶标抗体聚合物。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述标记酶为碱性磷酸酶或辣根碱过氧化物酶；和/或

所述交联试剂为同型双功能交联剂。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述同型双功能交联剂选自二(磺基琥珀)辛二酸或其衍生物。