[发明专利]一种检测试剂盒及其制备方法和肌钙蛋白T的检测方法

说明书

本发明属于体外检测技术领域，具体涉及一种检测试剂盒及其制备方法和应用。本发明的检测试剂盒包括：磁分离试剂和酶标试剂；磁分离试剂，包括：肌钙蛋白T抗体包被的金磁微粒；或，包括：链霉亲和素包被的金磁微粒以及生物素标记的肌钙蛋白T抗体；酶标试剂，包括：酶标抗体聚合物；酶标抗体聚合物包括：酶标抗体至少两个，以及碳桥；碳桥联接任意两个或以上、相邻或不相邻的酶标抗体，且碳桥上具有用于联接酶标抗体的联接位点，联接位点至少两个；酶标抗体包括检测抗体和偶联于检测抗体的标记酶，联接位点联接检测抗体和/或标记酶。进行化学发光检测时，进而放大化学发光法的反应信号值，且可增强本发明检测试剂捕获抗原的敏感度，提高检测灵敏度。

技术领域

本发明属于体外检测技术领域，具体涉及一种检测试剂盒及其制备方法和肌钙蛋白T的检测方法。

背景技术

肌钙蛋白(Tn)是肌肉组织收缩的调节蛋白，位于收缩蛋白的细肌丝上，在肌肉收缩和舒张过程中起到非常重要的调节作用。心肌肌钙蛋白(cTn)则仅存在于心肌细胞中，是由肌钙蛋白T(cTnT)、肌钙蛋白I(cTnI)和肌钙蛋白C(cTnC)等3个亚单位组成的球形络合物分子。cTnT和cTnI是心肌细胞特有的抗原，在心肌细胞损伤时从心肌纤维上降解下来。在心肌细胞内，绝大部分cTn以复合体的形式结合在细肌丝上，少量的cTn以游离形式存在于细胞质中。健康个体正常情况下外周血中检测不到cTn，但是，当心肌细胞受到缺血、缺氧等损害时，细胞膜通透性增高，游离状态的cTn首先释放到附近的心肌间质、淋巴管和微血管中，随血液循环逐渐进入外周血中。进一步的，随着缺血时间的持续，肌丝陆续崩解，导致大量的cTn持续释放至血液中，高浓度的cTn会持续7d以上，峰值多出现在严重缺血后1～2d，其浓度可达到正常上限的20～50倍。血清中cTn升高反映了心肌细胞受损，其特异性与敏感性均高于以往常用的心肌酶谱。

根据心肌梗死的新定义，当cTn浓度高于健康人群参考范围上限的第99百分位值，且临床上具有心肌缺血表现，或者有ECG的特征性改变时，即可诊断为心肌梗死。血液中肌钙蛋白增加的早期可检测性依赖于所使用的特定肌钙蛋白检测的分析灵敏度。对临床表现出急性胸痛的患者，医生需立即使用hs cTn(高灵敏度心肌肌钙蛋白)进行检测。患者就诊时首次hs cTn检测值低于或等于参考范围上限，3h后的hs cTn检测值高于参考范围上限，且升高的幅度大于参考范围上限的50％，可考虑为心肌坏死；若患者的初始hs cTn检测值高于参考范围上限，也需在3h后重复检测hs cTn。如果第二次检测值高于参考范围上限，且升高的幅度大于初始值的20％，也可考虑为心肌坏死。在此基础上，还可以选择性的在6h后进行第三次hs cTn检测。同样，当6h后的hs cTn检测值高于参考范围上限，且升高的幅度大于参考范围上限的50％或大于初始值的20％，可确诊为心肌坏死。几项研究表明，并由相关机构推荐，高灵敏度-心肌肌肌钙蛋白T(hs cTnT)检测有助于将观察时间从6h缩减到3h，甚至是0或1h。hs cTnT检测不仅实现了对AMI的早期诊断和鉴别诊断，而且作为导致心血管损伤事件的多种危险因子中的“终点”标志物，对于急性冠脉综合征、心力衰竭及稳定型冠心病患者的心血管事件具有预测价值。对于这部分患者而言，通过及早诊断并实施治疗和干预，能大大降低再次发生心血管疾病的风险，节省总体医疗花费，有效提高生存率。而且hscTnT检测对一般人群的心血管事件风险也具有重要的预测价值。

发光免疫分析法是基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种技术手段，具有灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害等优点，目前主要以化学发光法和电化学发光法为主。电化学发光免疫测定法(Elecsys)发展于1996年，是继放射免疫、酶免疫、化学发光免疫测定之后的新一代标记免疫测定技术，在发光反应中加入了电化学反应，是电化学和免疫测定相结合的产物。但是，电化学发光成本较为昂贵，其产品走高端线路，高昂的价格对使用的医疗机构和患者带来了明显的经济压力。