[发明专利]一种靶向CD22的嵌合抗原受体方法及用途

权利要求书

1.一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自：

(1)含有依次连接的抗CD22单链抗体的编码序列、人CD8α铰链区的编码序列、人CD8跨膜区的编码序列、人41BB胞内区的编码序列、人CD3ζ胞内区的编码序列的多核苷酸序列；和

(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列。

2.如权利要求1所述的多核苷酸序列，其特征在于，

在所述抗CD22单链抗体的编码序列前的所述信号肽的编码序列如SEQ ID NO:1第1-63位核苷酸序列所示；和/或

所述抗CD22单链抗体的重链可变区的编码序列如SEQ ID NO:1第64-435位核苷酸序列所示；和/或

所述抗CD22单链抗体的轻链可变区的编码序列如SEQ ID NO:1第481-801位核苷酸序列所示；和/或

所述人CD8α铰链区的编码序列如SEQ ID NO:1第802-942位核苷酸序列所示；和/或

所述人CD8跨膜区的编码序列如SEQ ID NO:1第943-1008位核苷酸序列所示；和/或

所述人41BB胞内区的编码序列如SEQ ID NO:1第1009-1152位核苷酸序列所示；和/或

所述人CD3ζ胞内区的编码序列如SEQ ID NO:1第1153-1485位核苷酸序列所示。

3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第1-21位氨基酸所示；和/或

所述抗CD22单链抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第22-145位氨基酸所示；和/或

所述抗CD22单链抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第161-267位氨基酸所示；和/或

所述人CD8α铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第268-314位氨基酸所示；和/或

所述人CD8跨膜区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第315-336位氨基酸所示；和/或

所述人41BB胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第337-384位氨基酸所示；和/或

所述人CD3ζ胞内区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第385-495位氨基酸所示。

4.一种核酸构建物，所述核酸构建物含有权利要求2所述的多核苷酸序列；

优选地，所述核酸构建物为载体；

更优选地，所述核酸构建物为逆转录病毒骨架载体，含有复制起始位点，3’LTR，5’LTR，以及权利要求4所述的多核苷酸序列。

5.一种逆转录病毒包装，所述逆转录病毒含有权利要求4所述的骨架载体，以及gag-pol载体和VSVG载体，通过磷酸钙转染法进行逆转录病毒包装。

6.一种细胞株PG13，所述感染权利要求5所包装好的逆转录病毒，形成PG13-CD22-41BBz产毒细胞株。

7.一种单克隆细胞株筛选，所述权利要求6制备好的PG13-CD22-41BB z产毒细胞株通过有限稀释法进行高表达CD22-41BB z CAR的单克隆细胞株筛选。

8.权利要求1－2中任一项所述的多核苷酸序列、权利要求3所述的融合蛋白、权利要求4所述的核酸构建物、权利要求5所述的逆转录病毒包装、或权利要求6所述的产毒细胞株的制备治疗CD22介导的疾病的药物中的用途；

优选地，所述CD22介导的疾病为非霍奇金淋巴瘤，急性淋巴瘤白血病。