[发明专利]补料发酵工艺生产雷帕霉素的方法

权利要求书

1.补料发酵工艺生产雷帕霉素的方法，其特征在于，以吸水链霉菌(Streptomyeeshygroscopicus)作为发酵菌种，将种子液接入装有液体发酵培养基的发酵罐内，采用补料发酵工艺生产雷帕霉素，发酵罐培养时间为168-216h；

其中，发酵48h开始用氨水控制发酵液pH值为4.65-5.15，发酵96h开始按如下A-D每天批补葡萄糖水溶液，直至发酵结束；

A、发酵96h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的5.0-7.0％；

B、发酵120h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的3.2-5.0％；

C、发酵144h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的2.4-3.2％；

D、发酵168h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的1.0-2.4％；

所述葡萄糖水溶液的浓度为50％。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵96h开始按如下a-d每天批补葡萄糖水溶液；

a、发酵96h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的5.4-6.0％；

b、发酵120h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的3.6-4.6％；

c、发酵144h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的2.6-3.0％；

d、发酵168h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的1.6-2.0％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用氨水控制发酵液pH值的具体方法为：

发酵48-144h，用氨水控制发酵液pH值为4.65-4.90；

发酵144-216h，用氨水控制发酵液pH值为4.90-5.15；

所述氨水的浓度为23％。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，用氨水控制发酵液pH值的具体方法为：

发酵48-144h，用氨水控制发酵液pH值为4.70-4.80；

发酵144-216h，用氨水控制发酵液pH值为4.95-5.05。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵条件为：发酵罐的罐温25.0-29.0℃，搅拌转速350-550rpm，罐压为0.04-0.06MPa，通气比1:1；优选地，发酵条件为：27.0-28.0℃，400-500rpm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液体发酵培养基的配方为：棉籽饼粉25g/L、L-赖氨酸盐酸盐15g/L、葡萄糖80g/L、酵母抽提物2g/L、磷酸氢二钾1g/L、磷酸二氢钾1g/L、氯化钠5g/L、甘油10g/L和消泡剂0.5g/L；

其中，所述棉籽饼粉中蛋白质含量为50～55％；和/或

所述消泡剂为聚醚类非离子表面活性剂，比重1.0115，羟值55.1-57.8，含量99％。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将菌浓达16-25％的种子液按8-12％v/v的接种量接入液体发酵培养基中，装液量按50L发酵罐容积计为30L。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)菌种活化：采用低温保存甘油管菌种传斜面，于28.0-29.0℃培养120h，然后从培养成熟斜面挖块，大小为1.0cm×2.5cm，接入一级母瓶中，在28.0-29.0℃，摇床转速300rpm的条件下培养48h，得到活化后的菌液；所述一级母瓶为容积750ml的三角烧瓶，装有80ml种子培养基；

2)种子液制备：取步骤1)所得菌液30ml接入种子罐内，在27.0-28.0℃，搅拌转速300-400rpm，罐压为0.04-0.06MPa，通气比1:1的条件下培养48h，得到菌浓为20％的种子液；所述种子罐的容积为15L，装有10L种子培养基；

3)发酵培养及补料：取步骤2)所得种子液3L接入发酵罐内，在27.0-28.0℃，搅拌转速400-500rpm，罐压为0.04-0.06MPa，通气比1:1的条件下进行发酵培养，发酵罐培养时间为214h；所述发酵罐的容积为50L，装有30L液体发酵培养基；

发酵过程中，按表1控制发酵体系pH值并进行补料：

表1

培养时间，h	发酵体系pH值	补糖比例，％
0	/	/
22	/	/
46	4.86	/
48	4.80	/
54	/	/
70	4.70	/
94	4.78	/
96	/	5.4
118	4.76	/
120	/	4.0
142	4.70	/
144	4.95	2.6
151	5.00	/
166	4.95	/
168	/	2.0
190	4.95	/
196	/	/
214	5.01	/

其中，步骤1)和2)所述种子培养基的配方为：豆粕粉21g/L、L-赖氨酸盐酸盐6g/L、葡萄糖20g/L、酵母抽提物6g/L和消泡剂2g/L；

所述豆粕粉中蛋白质含量为42～45％；和/或

所述消泡剂为聚醚类非离子表面活性剂，比重1.0115，羟值55.1-57.8，含量99％。