[发明专利]补料发酵工艺生产雷帕霉素的方法

说明书

本发明提供一种补料发酵工艺生产雷帕霉素的方法，其特征在于，以吸水链霉菌(Streptomyees hygroscopicus)作为发酵菌种，将种子液接入装有液体发酵培养基的发酵罐内，采用补料发酵工艺生产雷帕霉素，发酵罐培养时间为168‑216h；其中，发酵48h开始用氨水控制发酵液pH值为4.65‑5.15，发酵96h开始按每天批补葡萄糖水溶液，直至发酵结束。采用本发明的补料工艺，所需原材料成本低廉，操作简便，结果稳定，HPLC法测定发酵单位可达1000ug/ml以上，适合于规模化生产。

技术领域

本发明属于发酵工程技术领域，具体地说，涉及一种补料发酵工艺生产雷帕霉素的方法。

背景技术

雷帕霉素作为新型大环内酯类的抗排斥药物，是目前世界上最新的强效免疫抑制剂，临床上用于器官移植的抗排斥反应和自身免疫性疾病的治疗。它是吸水链霉菌发酵过程中产生的。

在发酵过程中，影响雷帕霉素生物合成的因素很多，如pH、通风、搅拌转速、温度以及培养基营养成分等。其中pH和碳源对代谢影响较大，需加以有效控制。

发明内容

本发明的目的是提供一种补料发酵工艺生产雷帕霉素的方法。

为了实现本发明目的，本发明提供一种补料发酵工艺生产雷帕霉素的方法，以吸水链霉菌(Streptomyees hygroscopicus)作为发酵菌种，将种子液接入装有液体发酵培养基的发酵罐内，采用补料发酵工艺生产雷帕霉素，发酵罐培养时间为168-216h(优选188-214h)。

其中，发酵48h开始用氨水(浓度为23％)控制发酵液pH值为4.65-5.15，发酵96h开始按如下A-D每天批补葡萄糖水溶液(浓度为50％)，直至发酵结束；

A、发酵96h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的5.0-7.0％；

B、发酵120h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的3.2-5.0％；

C、发酵144h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的2.4-3.2％；

D、发酵168h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的1.0-2.4％。

优选地，批补葡萄糖水溶液的具体方法为；

a、发酵96h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的5.4-6.0％；

b、发酵120h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的3.6-4.6％；

c、发酵144h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的2.6-3.0％；

d、发酵168h，补加的葡萄糖水溶液的体积为初始发酵液体积的1.6-2.0％。

前述的方法，用氨水控制发酵液pH值的具体方法为：发酵48-144h，用氨水控制发酵液pH值为4.65-4.90；发酵144-216h，用氨水控制发酵液pH值为4.90-5.15。

优选地，用氨水控制发酵液pH值的具体方法为：发酵48-144h，用氨水控制发酵液pH值为4.70-4.80；发酵144-216h，用氨水控制发酵液pH值为4.95-5.05。

前述的方法，发酵条件为：发酵罐的罐温25.0-29.0℃(优选27.0-28.0℃)，搅拌转速350-550rpm(优选400-500rpm)，罐压为0.04-0.06MPa，通气比1:1。

本发明中使用的液体发酵培养基的配方为：棉籽饼粉25g/L、L-赖氨酸盐酸盐15g/L、葡萄糖80g/L、酵母抽提物2g/L、磷酸氢二钾1g/L、磷酸二氢钾1g/L、氯化钠5g/L、甘油10g/L和消泡剂0.5g/L。