[发明专利]一种耐低温酸菜乳酸菌菌种的分离方法在审
| 申请号： | 201811413539.4 | 申请日： | 2018-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN109234165A | 公开（公告）日： | 2019-01-18 |
| 发明（设计）人： | 张晓黎;吴兴壮;高雅;杜霖春;张华;王琛;韩艳秋;张锐;李莉峰 | 申请（专利权）人： | 辽宁省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N1/02 | 分类号： | C12N1/02;C12N1/36 |
| 代理公司： | 沈阳圣群专利事务所(普通合伙) 21221 | 代理人： | 张立新 |
| 地址： | 110161 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酸菜 乳酸菌菌种 耐低温 培养液 稀释菌液 自然发酵 重量份 乳酸菌 无菌生理盐水 生产周期 发酵液接入 平板培养基 梯度稀释法 低温驯化 恒温培养 无菌条件 防腐剂 单菌落 透明圈 产酸 稀释 生长 健康 | ||
1.一种耐低温酸菜乳酸菌菌种的分离方法，其特征在于步骤如下：在无菌条件下取1重量份自然发酵的酸菜发酵液接入9-11重量份的MRS液体培养基中在28℃培养10-14小时得培养液，取培养液加入到无菌生理盐水中通过梯度稀释法将其稀释至10-5、10-6、10-7或10-8的稀释菌液，将稀释菌液分别涂布在MRS和M17平板培养基上，经28℃恒温培养48-96小时，挑取有透明圈的单菌落进行纯化、产酸、鉴定、低温驯化得耐低温的乳酸菌菌种。
2.根据权利要求1所述的一种耐低温酸菜乳酸菌菌种的分离方法，其特征在于所述的自然发酵的酸菜发酵液在制备时白菜入酸菜缸的过程中除了盐和水不添加任何其他物质，发酵酸菜的温度在15℃以下。
3.根据权利要求1所述的一种耐低温酸菜乳酸菌菌种的分离方法，其特征在于所述的纯化是将有透明圈的单菌落以划线的方式在MRS培养基上继续分离纯化培养2次。
4.根据权利要求1所述的一种耐低温酸菜乳酸菌菌种的分离方法，其特征在于所述的产酸是将纯化后的菌种接种到MRS液体培养基中，经28℃恒温培养36-48小时后，测定其PH值，将PH值高于4的菌株淘汰掉，得疑似乳酸菌株。
5.根据权利要求1所述的一种耐低温酸菜乳酸菌菌种的分离方法，其特征在于所述的鉴定是指疑似乳酸菌株通过糖发酵实验和DNA测序确定其为乳酸菌菌种。
6.根据权利要求1所述的一种耐低温酸菜乳酸菌菌种的分离方法，其特征在于所述的低温驯化是将鉴定后的乳酸菌菌种通过逐步降低温度方法进行培养得驯化后乳酸菌。
7.根据权利要求6所述的一种耐低温酸菜乳酸菌菌种的分离方法，其特征在于所述的逐步降低温度方法进行培养是将驯化后乳酸菌在15℃、13℃、11℃各培养2小时，然后在9℃继续培养10小时。
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