[发明专利]一种副粘病毒的拯救系统和副粘病毒拯救方法

权利要求书

1.一种副粘病毒的拯救系统，其特征在于，它包括：病毒基因组质粒、N质粒、P质粒、L质粒、pCDIBP-T7RNAP质粒和pT7-T7RNAP质粒；

所述病毒基因组质粒是带有T7启动子、且带有副粘病毒的基因组或反基因组序列的质粒；

所述N质粒是带有启动子序列和前述副粘病毒对应N蛋白或NP蛋白的DNA序列的质粒；

所述P质粒是带有启动子序列和前述副粘病毒对应P蛋白的DNA序列的质粒；

所述L质粒是带有启动子序列和前述副粘病毒对应L蛋白的DNA序列的质粒；

所述pCDIBP-T7RNAP质粒是带有CMV启动子和T7RNA聚合酶DNA序列的质粒；

所述pT7-T7RNAP质粒是带有T7启动子和T7RNA聚合酶DNA序列的质粒。

2.如权利要求1所述的拯救系统，其特征在于，所述pCDIBP-T7RNAP质粒具有如SEQ IDNO.1所述的序列。

3.如权利要求1或2所述的拯救系统，其特征在于，所述pT7-T7RNAP质粒具有如SEQ IDNO.2所示的序列。

4.一种副粘病毒拯救方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将权利要求1～3所述病毒基因组质粒、N质粒、P质粒、L质粒、pCDIBP-T7RNAP质粒、pT7-T7RNAP质粒和动物细胞混合；

(2)使用物理或化学方法介导多质粒共转染；

(3)培养细胞；

(4)收集病毒。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述N质粒、P质粒和L质粒所带的启动子是T7启动子；病毒基因组质粒、N质粒、P质粒、L质粒、pCDIBP-T7RNAP质粒、pT7-T7RNAP按所述顺序的质量比例是12:(8～10):(4～10):(1～8):4:4。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述N质粒、P质粒和L质粒所带的启动子是CMV启动子；病毒基因组质粒、N质粒、P质粒、L质粒、pCDIBP-T7RNAP质粒、pT7-T7RNAP按所述顺序的比例是12:(8～10):(4～10):8:4:(2～4)。

7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于：步骤(2)细胞数不低于5×10⁵个，所述病毒基因组质粒用量不低于12微克。

8.如权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述动物细胞为CHO、MRC-5、WI-38、HEK 293、EB66和Vero细胞中的至少一种。

9.如权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(1)所述动物细胞为Vero细胞。

10.如权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)所述的物理或化学方法为电穿孔法或脂质体转染法。