[发明专利]一种大口黑鲈弹状病毒卵黄抗体

说明书

本发明公开了一种大口黑鲈弹状病毒卵黄抗体，包括通过以下方法制备而得：(1)从感染大口黑鲈弹状病毒的大口黑鲈中分离培养获得大口黑鲈弹状病毒；(2)对大口黑鲈弹状病毒进行灭活；(3)以灭活的大口黑鲈弹状病毒为抗原对180‑190日龄的产蛋鸡进行免疫，收集免疫后产蛋鸡的鸡蛋，从鸡蛋的卵黄中提取纯化卵黄抗体。本发明有效中和大口黑鲈弹状病毒，从而终止病毒感染，为后续用于该病毒的防控提供了一种有效的被动免疫制剂，对于降低亲本的带毒率和提高苗种的存活率具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及鱼用生物制品生产技术领域，特别涉及一种大口黑鲈弹状病毒卵黄抗体。

背景技术

大口黑鲈Micropterussalmoides俗称加州鲈，原产于美国加利福尼亚州密西西比河水系，肉质鲜美、在市场上很受欢迎，加之具有生长迅速、易起捕，适温范围广，耐低氧能力强等特点，一直深受养殖户的欢迎。我国年产量可达30多万吨，是全球产量最高的国家。2016年浙江省大口黒鲈养殖面积近5万亩。近年来加州鲈已成为跑道式循环水养殖的主要养殖品种。但无论是传统的高密度养殖还是跑道式集中圈养模式，都存在着疫病快速传播的潜在危险。其中病毒性病害，目前尚无有效的治疗药物，一旦爆发，会造成严重的经济损失。采用免疫预防措施是病毒性病害防治的重要手段。

大口黑鲈弹状病毒(Micropterussalmoidesrhabdovirus，MSRV)属于水泡性病毒属，为线性负链单链RNA病毒，大小为53nm×140nm，形态似棒状或子弹状。大口黑鲈鱼苗弹状病毒病常有爆发。其发病时间主要在4～5月、10～11月，水温在25℃～28℃最容易发病，通常发生在水温突然升高或突然降低时，危害的主要对象是苗种。感染途径主要既有以水体为媒介的水平传播，亦可由亲鱼通过垂直传播给苗种。该病传播快、潜伏期短、死亡率高。近年来，此病在加州鲈鱼苗种培育及养殖早期流行，严重时80％池塘发病，死亡率高，短时间内可高达90％，经济损失巨大。免疫预防是防治病毒性病害的主要手段。免疫预防措施有特异性和非特异性两大类，其中特异性预防包括主动免疫和被动免疫。由于弹状病毒主要危害5cm以下的鲈鱼苗种，而这一阶段的鱼苗免疫系统发育不完善，主动免疫预防难以实现。以抗体作为被动免疫的预防措施具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大口黑鲈弹状病毒卵黄抗体，可有效中和大口黑鲈弹状病毒，从而终止病毒感染，为后续用于该病毒的防控提供了一种有效的被动免疫制剂，对于降低亲本的带毒率和提高苗种的存活率具有重要的意义。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种大口黑鲈弹状病毒卵黄抗体，通过以下方法制备而得：

(1)从感染大口黑鲈弹状病毒的大口黑鲈鱼苗(体长2-5cm)中分离培养获得大口黑鲈弹状病毒；

(2)对大口黑鲈弹状病毒进行灭活；

(3)以灭活的大口黑鲈弹状病毒为抗原对180-190日龄的产蛋鸡进行免疫，收集免疫后产蛋鸡的鸡蛋，从鸡蛋的卵黄中提取纯化卵黄抗体。

卵黄抗体是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，是存在于卵黄中的唯一的免疫球蛋白，获取方便，免疫蛋鸡所产的鸡蛋卵黄中即含有高水平的特异性抗体，具有化学性质稳定、产量高、成本低、特异性强且无任何毒副作用的优势；由于与大口黑鲈种系发生距离远，不会发生交叉血清学反应。因此选用卵黄抗体。本发明制备的卵黄抗体可有效中和病毒的感染，可应用于大口黑鲈弹状病毒病的防治与诊断试剂的开发。本发明制备的卵黄抗体是一种专门针对大口黑鲈鱼苗使用的免疫制剂。

步骤(1)从感染大口黑鲈弹状病毒的大口黑鲈中分离培养获得大口黑鲈弹状病毒具体操作如下：

①取感染MSRV的大口黑鲈鱼苗，匀浆后冻融2次，离心，取上清，经0.25μm的细菌过滤器过滤，滤液即为病毒粗提液；