[发明专利]一种磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒及提取方法

说明书

本发明涉及一种磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒，包括以下组分：磁珠、裂解结合液、洗涤液和洗脱液。还提供了一种提取血浆游离DNA的方法，使用使用试剂盒进行提取，包括以下步骤：S1：向血浆样品中加入所述磁珠和裂解结合液，混匀后静置5‑10min，在磁力架上弃掉溶液；S2：使用所述洗涤液洗涤磁珠，在磁力架上弃掉溶液；S3：使用所述洗脱液洗脱磁珠上吸附的DNA。本发明提供的试剂盒和方法可简单快速地从血浆中提取游离DNA，并且避免基因组DNA的干扰，从而为后期的诊断性检测提供了良好的游离DNA样品，极大地降低了假阳性的发生。

技术领域

本发明涉及血液游离DNA检测领域，更特别地，涉及一种磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒以及提取血浆游离DNA的方法。

背景技术

游离循环DNA是一种存在于动植物与人体液中细胞外的游离状态核酸。目前已在血浆，唾液，尿液，脑脊液，胃液，腹腔液和粪便中均可检测到。

香港中文大学教授卢煜明在1997年和1998年的工作中发现，母体血液中存在着胎儿的游离DNA，证明了使用胎儿游离DNA来诊断遗传性疾病的可行性和实际性，最终开创了利用第二代基因测序来检测唐氏综合症的新途径，并在90多个国家得到了应用，开启了无创产前诊断技术。

游离循环DNA的基因检测已经在疾病防控，胎儿无创产前筛查和肿瘤研究中越来越重要的基因检测方法之一。

使用游离循环DNA的基因检测的第一步主要是对人类血浆血清进行游离DNA提取，提取产物的质量直接影响到检测结果的准备性和可靠性，在血浆与血清中，游离DNA片段小，含量低，并往往有基因组DNA的残留，而基因组DNA的残留对游离DNA检测结果会造成极大的影响，从而能有效提取游离DNA，而又能有效分离基因组DNA的试剂盒显的尤为重要。目前市面上的游离DNA提取试剂盒更注重产量，而无法有效的去除基因组DNA。

发明内容

磁珠法采用磁珠为载体的分离技术，属于固相抽提法。由于磁珠法提取核酸操作简单，快速，重复性好，产量高，无需接触酚/氯仿等有毒试剂，可实现自动化操作，相较于传统DNA提取有无法比拟的优势。

基于此，本发明提供了一种磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒，包括以下组分：磁珠、裂解结合液、洗涤液和洗脱液。

在一个优选实施方案中，所述裂解结合液包含三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸、氯化钠、曲拉通X-100、异硫氰酸胍、盐酸胍和异丙醇。

在一个优选实施方案中，所述裂解液中三羟甲基氨基甲烷的浓度为20-80mmol/L，乙二胺四乙酸的浓度为5-20mmol/L，氯化钠的浓度为50-500mmol/L,，曲拉通X-100的浓度为1-10％体积分数，异硫氰酸胍的浓度为1-6mol/L，盐酸胍的浓度为1-8mol/L,，异丙醇的浓度为20-60％体积分数，PH值为3-5。

在一个优选实施方案中，所述洗涤液包括洗涤液I和II，所述洗涤液I包含盐酸胍、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸、氯化钠、无水乙醇、异丙醇和曲拉通X-100；

所述洗涤液II包含三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸和无水乙醇。

在一个优选实施方案中，所述洗涤液I中盐酸胍的浓度为1-8mol/L，三羟甲基氨基甲烷的浓度为20-80mmol/L，乙二胺四乙酸的浓度为5-20mmol/L，氯化钠的浓度为50-500mmol/L，无水乙醇的浓度为30-70％体积分数，异丙醇的浓度为20％-50％体积分数，曲拉通X-100的浓度为1-5％体积分数；

所述洗涤液II中，三羟甲基氨基甲烷的浓度为20-80mmol/L，乙二胺四乙酸的浓度为5-20mmol/L，无水乙醇的浓度为30-80％体积分数。

在一个优选实施方案中，所述洗脱液包含三羟甲基氨基甲烷和乙二胺四乙酸。