[发明专利]一种基因工程菌及其在催化二腈选择性水解中的应用在审
| 申请号： | 201811417653.4 | 申请日： | 2018-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN109554384A | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 徐毅;马宝娣;吴小梅;邱静雯;刘明春 | 申请（专利权）人： | 上海应用技术大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12N9/78;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海申汇专利代理有限公司 31001 | 代理人： | 王婧 |
| 地址： | 200235 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因工程菌 腈水解酶 二腈 催化 选择性水解 重组表达载体 抗癫痫药物 生产成本低 工业开发 加巴喷丁 有机溶剂 制备条件 水解 两段 应用 携带 基因 生产 | ||
1.一种重组表达载体，其特征在于，含有两段腈水解酶nh基因。
2.如权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述的腈水解酶基因的序列为SEQID NO:1。
3.如权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述的两段腈水解酶nh基因分别连接于pRSFDuet-1质粒的两个多克隆酶切位点上。
4.一种重组表达转化体，其特征在于，包含宿主微生物，所述的宿主微生物携带权利要求1-3中任一项所述的重组表达载体。
5.一种基因工程菌，其特征在于，为携带权利要求1-3中任一项所述的重组表达载体的大肠埃希氏菌BL21(DE3)。
6.权利要求4所述的重组表达转化体或权利要求5所述的基因工程菌的培养方法，其特征在于，包括：将权利要求4所述的重组表达转化体或权利要求5所述的基因工程菌接种到培养基中进行培养，从培养物中获得腈水解酶细胞。
7.如权利要求6所述的培养方法，其特征在于，所述培养基含有可溶性淀粉20g/L，酵母粉15g/L，NaCl5g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，卡纳霉素50μg/mL，培养基的初始pH为7.0。
8.如权利要求6所述的培养方法，其特征在于，包括：将上述重组大肠埃希氏菌接种至培养基中，30℃，180rpm培养，培养4h，加入0.5mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷，在25-35℃进行诱导表达。
9.权利要求4所述的重组表达转化体或权利要求5所述的基因工程菌作为催化剂在选择性水解1-氰基环己基乙腈中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，包括：在pH为7.0～7.5的磷酸盐缓冲液中，加入权利要求4所述的重组表达转化体或其经超声破碎后的酶液、或者权利要求5所述的基因工程菌或其经超声破碎后的酶液，以及底物1-氰基环己基乙腈，进行位点选择性水解反应，形成1-氰基环己基乙酸。反应过程用碳酸钠或氨水调节反应pH在7.0～7.5之间。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海应用技术大学，未经上海应用技术大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811417653.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
