[发明专利]一种拯救麻疹Schwarz/Moraten疫苗株的系统和方法在审
| 申请号： | 201811421283.1 | 申请日： | 2018-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN111218475A | 公开（公告）日： | 2020-06-02 |
| 发明（设计）人： | 刘兰军;张勇侠;陈宗香;高雅丽;康庄 | 申请（专利权）人： | 成都生物制品研究所有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/45;C12N7/00;A61K39/155;A61P31/14 |
| 代理公司： | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峡;张娟 |
| 地址： | 610023 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 拯救 麻疹 schwarz moraten 疫苗 系统 方法 | ||
1.一种麻疹Schwarz/Moraten疫苗株拯救系统，其特征在于，它包括病毒全长质粒pT7MVSW和辅助质粒；
所述全长质粒是包含T7启动子、以及麻疹Schwarz/Moraten疫苗株基因组或反基因组序列的质粒；
所述辅助质粒包括pT7-SWN、pT7-SWP、pT7-SWL、pT7-T7RNAP和pCDIBP-T7RNAP；
所述pT7-SWN是带有T7启动子和麻疹N蛋白编码序列的质粒；
所述pT7-SWP是带有T7启动子和麻疹P蛋白编码序列的质粒；
所述pT7-SWL是带有T7启动子和麻疹L蛋白编码序列的质粒；
所述pT7-T7RNAP是带有T7启动子和T7RNA聚合酶编码序列的质粒；
所述pCDIBP-T7RNAP是带有CMV增强子序列、CMV启动子序列和T7RNA聚合酶编码序列的质粒。
2.如权利要求1所述的系统，其特征在于，所述麻疹Schwarz/Moraten疫苗株基因组序列的5’端或反基因组的3’端还连接有锤头核酸酶序列；所述锤头核酸酶序列如SEQ IDNO.1所示。
3.如权利要求1所述的系统，其特征在于，所述麻疹Schwarz/Moraten疫苗株基因组序列的3’端或反基因组的5’端还连接有丁型肝炎病毒核酶序列；所述丁型肝炎病毒核酶序列如SEQ ID NO.2所示。
4.一种麻疹Schwarz/Moraten疫苗株拯救方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将权利要求1～3所述病毒全长质粒pT7MVSW和辅助质粒与哺乳动物细胞混合；
(2)电击转染；
(3)培养细胞，收获病毒。
5.如权利要求4所述的拯救方法，其特征在于，所述pT7MVSW、pT7-SWN、pT7-SWP、pT7-SWL、pT7-T7RNAP和pCDIBP-T7RNAP的用量比例为12:8:4:1:2:4。
6.如权利要求4所述的反向遗传学方法，其特征在于：所述哺乳动物细胞为CEF、BHK、293T、BSR、CHO、MRC-5、WI-38、HEK 293、EB66和Vero细胞中的一种。
7.如权利要求4所述的拯救方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞为Vero细胞。
8.如权利要求4所述的拯救方法，其特征在于：所述哺乳动物细胞数目不低于105个；所述pT7MVSW用量不低于3微克。
9.如权利要求4所述的拯救方法，其特征在于：所述哺乳动物细胞数目不低于5×105个；所述pT7MVSW用量不低于12微克。
10.如权利要求4所述的拯救方法，其特征在于：步骤(2)的电转是在直径为2mm的BioRad电转杯中进行的，电转参数为：指数波、140V、950μF电击1次。
11.权利要求4～10所述拯救方法所制备的麻疹Schwarz/Moraten疫苗株在制备麻疹疫苗中的用途。
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