[发明专利]一种伪狂犬病病毒的间接ELISA检测试剂盒有效
申请号: | 201811424706.5 | 申请日: | 2018-11-27 |
公开(公告)号: | CN109655610B | 公开(公告)日: | 2022-03-29 |
发明(设计)人: | 黄元;向华;王晓虎;陈晶 | 申请(专利权)人: | 广东省农业科学院动物卫生研究所 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569;G01N33/535;G01N33/543 |
代理公司: | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人: | 胡辉 |
地址: | 510640 广东省广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 狂犬病 病毒 间接 elisa 检测 试剂盒 | ||
1.SEQ ID NO:1所示氨基酸序列在制备伪狂犬病毒间接ELISA检测试剂盒中的应用。
2.SEQ ID NO:2所示核酸序列在制备伪狂犬病毒间接ELISA检测试剂盒中的应用。
3.一种伪狂犬病毒的间接ELISA检测试剂盒,其特征在于,其组成包括:重组蛋白包被抗原、阳性对照血清、阴性对照血清、封闭液、酶标二抗、显色液及终止液和洗涤液;
所述重组蛋白包被抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述封闭液为含脱脂奶的PBST溶液,脱脂奶浓度为3g/100mL~5g/100mL。
5.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述酶标二抗为HRP标记的羊抗猪IgG。
6.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述显色液为TMB底物液;所述终止液为:1.2 mol/L~2mol/L 硫酸。
7.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述洗涤液为PBST 缓冲液。
8.一种伪狂犬病毒的间接ELISA检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)包被:用碳酸缓冲盐溶液稀释重组蛋白包被抗原,将重组蛋白包被抗原稀释为0.90mg/L,每孔加入80~120μL,3~7℃包被20~18h后甩干,用PBST洗涤;所述重组蛋白包被抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;
(2)封闭:每孔加入封闭液,36~38℃封闭1.5~2.5h后甩干,用PBS洗涤;
(3)待测血清作用条件:待测血清用稀释液稀释后,每孔加入80~120μL,36~38℃孵育0.8~1.2h后甩干,用PBST洗涤;
(4)二抗作用条件:将HRP标记的羊抗猪IgG用PBST稀释后,每孔加入80~120μL,36~38℃孵育0.8~1.2h后甩干,用PBST洗涤;
(5)显色:每孔加入显色液,36~38℃孵育8~12min后加终止液终止反应;
(6)读数:用酶标仪在450mn下读取OD数据,计算结果。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述封闭液为含脱脂奶的PBST溶液,脱脂奶浓度为3g/100mL~5g/100mL;所述显色液为TMB底物液;所述终止液为:1.2 mol/L~2mol/L 硫酸。
10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述稀释液含4.8~5.2%脱脂奶和4.8~5.2%大肠杆菌裂解稀释液的PBST。
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