[发明专利]一种伪狂犬病病毒的间接ELISA检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种伪狂犬病病毒的间接ELISA检测试剂盒。包括抗原重组蛋白的制备、间接ELISA方法的建立、判定标准和临床血清学应用。所述的抗原重组蛋白的制备方法为，人工合成如SEQ ID NO:2所示的序列，构建质粒表达载体，在大肠杆菌中进行原核表达，最终用镍柱亲和纯化获得。该试剂盒用于检测伪狂犬病病毒抗体，对伪狂犬病病毒2001年以后的流行病毒具有更准确的检测效果，其准确性具体表现为，其检验结果与基于流行毒株的微量血清抗体中和试验具有更好的符合率，因此更符合临床实际的抗体保护力水平。

技术领域

本发明属于兽医生物技术领域，涉及一种伪狂犬病病毒的间接ELISA检测试剂盒。

背景技术

猪伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由猪伪狂犬病病毒(PRV)引起的一种烈性传染病，主要引起母猪流产、死胎，仔猪出现神经症状，对养猪业危害极大。多年以来，我国采用的PR疫苗主要基于疫苗株Batha-K61制备，并取得较好的效果。然而2011年以来，在我国北方多个省份相继暴发猪伪狂犬病，继而向全国蔓延，其流行特征为Batha-K61等经典疫苗株不能提供足够的保护，并且致死率高。我国学者研究认为，猪伪狂犬病病毒的流行是由于病毒的变异造成。交叉中和试验表明，2011年以来的流行毒株的免疫原性与之前的经典毒株已经有了一定的差异。基因测序结果表明，与经典毒株相比，病毒在gB、gC、gD和gE等多个关键基因都发生了特征性的重大变异。由于流行毒株的变异，不仅急需更换与之相匹配的疫苗，而且需要建立与之相匹配的检测技术，一则用于新疫苗的抗体监控和免疫评价，二则用于建立与变异株疫苗相匹配的免疫程序，以适应针对当前流行毒株的防控需要。

酶联免疫吸附试验(ELISA)是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术，其用于检测特异性抗体，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。该技术在猪伪狂犬病的防控中发挥了重要的作用。其中针对gB蛋白的抗体ELISA检测，是猪伪狂犬病抗体监测和免疫效果评价的最重要和最常用的方法。

研究发现，2011年以来的猪伪狂犬病病毒，与经典的Batha-K61等传统疫苗株相比，基因发生了重大的变异，gB蛋白N端表位发生了总共17个氨基酸的替换和缺失。由于市售gB-ELISA试剂盒都是根据传统毒株建立的，gB重要抗原表位的变异，已影响到试剂盒的检测准确性。在2011年以来的临床实践中，许多用gB-ELISA试剂盒检测阳性率较高，免疫评价较好的养猪场，在变异株病毒到来时仍然会造成大面积感染。

抗体监控和免疫评价是伪狂犬病防控中的重要环节，没有准确的检测方法就难以建立良好的免疫程序，也难以保证免疫效果。由于当前流行的猪伪狂犬病病毒gB基因N端抗原表位的重大变异，当前ELISA检测试剂盒已不能准确反映猪群对流行病毒的真实保护力。

发明内容

由于伪狂犬病病毒2001年出现的变异，病毒gB重要抗原表位已经发生变化，当前ELISA试剂盒的检测结果已经不能准确反映猪群对流行病毒的真实保护力。为了解决上述技术问题，本发明建立一种检测PRV抗体的间接ELISA试剂盒。

本发明的目的在于提供一种伪狂犬病病毒的间接ELISA试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

SEQ ID NO:1所示氨基酸序列在制备伪狂犬病毒间接ELISA检测试剂盒中的应用。

SEQ ID NO:2所示核酸序列在制备伪狂犬病毒间接ELISA检测试剂盒中的应用。

一种伪狂犬病毒的间接ELISA检测试剂盒，其组成包括：重组蛋白包被抗原、阳性对照血清、阴性对照血清、封闭液、酶标二抗、显色液及终止液和洗涤液；

所述重组蛋白包被抗原中含有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列。

优选的，所述封闭液为含脱脂奶的PBST溶液，脱脂奶浓度为3g/100mL～5g/100mL。