[发明专利]子宫内膜异位症肾虚血瘀证大鼠模型的建立方法

权利要求书

1.子宫内膜异位症肾虚血瘀证大鼠模型的建立方法，其特征在于，准备3月龄雌性SD大鼠，体重200g左右，大鼠每日进行阴道细胞涂片检查，首先建立EMs肾虚血瘀证SD大鼠模型，包括以下步骤：

步骤1：堕胎伤肾：正常饲养一周后，按2∶1比例与3月龄SD雄性大鼠交配，妊娠第3天开始至妊娠第12天灌服羟基脲蒸馏水溶液，妊娠第12天灌服米非司酮1次，羟基脲动物给药量为每天每百克体重20mg，研粉溶于蒸馏水中灌服，米非司酮动物给药量为每天每百克体重375mg，研粉溶于蒸馏水中灌服，造成孕鼠流产；

步骤2：产后失于调摄：流产后大鼠阴道出血干净次日开始，每日14：00开始分批置入水桶内，水温与室温均保持为(10±0.5)℃，以木棒拔打强迫其不断游泳直到疲劳，时间长短存在个体差异，平均为(10±5)min，共3天，游泳后捞出实验大鼠，不予保温措施，任其暴露于空气中自然晾干；

步骤3：房劳伤肾：正常饲养一周后，措施1、2重复一次；

步骤4：自体内膜移植：无菌条件下麻醉大鼠，剖腹切取右侧宫角处1cm长子宫，剥离子宫内膜，剪取两块各约5mm×5mm的内膜组织块，将上皮层反向对着体壁，左右各一缝固在腹壁上，关腹，4周后随机取3只大鼠再次剖腹切取移植物送检，验证其已成活。

2.根据权利要求1所述的子宫内膜异位症肾虚血瘀证大鼠模型的建立方法，其特征在于，选择动情周期4～5天者为合格动物。

3.根据权利要求1所述的子宫内膜异位症肾虚血瘀证大鼠模型的建立方法，其特征在于，步骤2的水桶直径50cm，高100cm，桶内水深45cm。

4.根据权利要求1所述的子宫内膜异位症肾虚血瘀证大鼠模型的建立方法，其特征在于，采用双抗体放射免疫法，取步骤4的血清0.2ml加125I-E₂或125I-P0.2ml，加抗E₂或P抗体0.2ml，混匀后放37℃水浴30min，加入PEG-第二抗体1.0ml，混匀，离心后弃上清，用γ-计数器测定各管沉淀物的放射性强度，具体操作按试剂盒说明书进行。

5.根据权利要求4所述的子宫内膜异位症肾虚血瘀证大鼠模型的建立方法，其特征在于，于造模手术前、术后4周和治疗后，分别采血2ml置玻璃试管内，4000r/min，离心5min，取血清，在全自动生化分析仪上，采用透射比浊法检测IgG、IgM、IgA量。

6.根据权利要求5所述的子宫内膜异位症肾虚血瘀证大鼠模型的建立方法，其特征在于，采用酶结合免疫吸附测定法，在反应板上每孔加入50μl抗子宫内膜抗原1∶100包被，4℃过夜后，常法洗孔3次，用小牛血清的磷酸缓冲液封闭，30min后洗涤6次，加显色A液1滴，B液1滴，混匀，避光3～5min，测492nm波长吸光度A值。

7.根据权利要求6所述的子宫内膜异位症肾虚血瘀证大鼠模型的建立方法，其特征在于，分别采集EMs组及对照组肘静脉血3ml，注入空白试管中，离心10min(4℃3000rPmin)，取上清，-20℃恒温冷冻保存，采用双抗体夹心ELISA法测定各细胞因子水平，按试剂盒说明书进行。