[发明专利]工程化改造巨噬细胞及其在脓毒败血症中的应用有效

专利信息
申请号: 201811432902.7 申请日: 2018-11-28
公开(公告)号: CN109536454B 公开(公告)日: 2022-11-15
发明(设计)人: 张硌;陆琤;刘慧莹;柏长青;何园;张鹏飞;周晨辰;张鹏;李巍 申请(专利权)人: 中国人民解放军总医院第五医学中心
主分类号: C12N5/10 分类号: C12N5/10;C12N15/867;C12N15/24
代理公司: 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 代理人: 关畅
地址: 100039 北*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 工程 改造 巨噬细胞 及其 败血症 中的 应用
【说明书】:

发明公开了一种制备表达mIL4蛋白的巨噬细胞的方法。该方法包括如下步骤:使巨噬细胞表达mIL4蛋白,得到表达mIL4蛋白的巨噬细胞。按照该方法的步骤,本发明的发明人制备了慢病毒pCDH‑mIL4感染的RAW264.7细胞。实验证明,向小鼠脓毒败血症模型尾静脉注射慢病毒pCDH‑mIL4感染的RAW264.7细胞后,小鼠的存活率显著提高;向急性肺损伤的小鼠的气管注射慢病毒pCDH‑mIL4感染的RAW264.7细胞后,小鼠的存活率也显著提高。由此可见,慢病毒pCDH‑mIL4感染的RAW264.7细胞可以治疗脓毒败血症和急性肺损伤。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物医学领域,具体涉及工程化改造巨噬细胞及其在脓毒败血症中的应用。

背景技术

脓毒败血症是临床常见的急危重症,死亡率高,至今仍缺乏疗效高、副作用小的药物和治疗方法。细菌感染是导致脓毒败血症最常见的病因。细菌的产物,如细菌外壁成分LPS、外毒素等可直接或间接的刺激单核细胞、巨噬细胞、多形核中性粒白细胞等启动炎症进程,产生大量的TNF-α、IL-6、IL-1β等促炎细胞因子,过多的促炎因子分泌导致严重的炎症反应,造成脓毒休克甚至机体的死亡。抑制巨噬细胞的炎症反应成为预防和治疗败血症的一个重要方向,但迄今尚未发现有效方法。

白细胞介素-4(IL-4)是具有免疫活性的细胞因子,主要由活化的T细胞分泌产生。IL-4在免疫系统中作为重要的免疫细胞因子,不仅可以促进机体中靶细胞的分化与增殖,同时也可以加强细胞对病原体微生物的杀伤效应和机体的抗感染能力。IL-4可直接诱导巨噬细胞向M2型极化。相对于M1型巨噬细胞,M2型巨噬细胞的TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-12和IL-23等炎性因子表达量很低,但高表达抑炎因子IL-10、TGF-β、清道夫受体和精氨酸酶1,从而具有抑制炎症反应,促进损伤组织的修复的功能。但巨噬细胞自身并不分泌IL-4,且IL-4在体内的半衰期非常短,有效时间2-10min左右,很容易被机体所清除,这便使得直接注射IL-4很难在体内发挥抗炎作用。因此,开发一种长效缓释的IL-4释放体系十分必要,并具有迫切的临床需求和广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的是治疗脓毒败血症。

本发明首先保护一种制备表达mIL4蛋白的巨噬细胞的方法,可包括如下步骤:使巨噬细胞表达mIL4蛋白,得到表达mIL4蛋白的巨噬细胞。

上述方法中,所述“使巨噬细胞表达mIL4蛋白”可为将含有编码mIL4蛋白的基因的重组载体导入巨噬细胞,得到表达mIL4蛋白的巨噬细胞。

上述方法中,所述mIL4蛋白可为如下a1)或a2)或a3):

a1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白质;

a2)在序列表中序列2所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质;

a3)将a1)或a2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且具有相同功能的蛋白质。

上述方法中,所述编码mIL4蛋白的基因可为如下b1)或b2)所示的DNA分子:

b1)编码区如序列表中序列1所示的DNA分子;

b2)核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子。

上述方法中,所述重组载体可为重组慢病毒载体。

上述任一所述方法可包括如下步骤:

(1)利用所述重组慢病毒载体和慢病毒包装质粒转染慢病毒包装细胞,培养,获得慢病毒;

(2)将步骤(1)得到的慢病毒感染巨噬细胞,从而获得表达mIL4蛋白的巨噬细胞。

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