[发明专利]利用GC-MS法快速分析大豆香气特征化合物2-乙酰基-1吡咯啉含量的方法及应用

说明书

本发明提供了利用GC‑MS法快速分析大豆香气特征化合物2‑乙酰基‑1吡咯啉含量的方法，属于有机物检测领域。本发明以气相色谱‑质谱技术快速测定大豆中香气特征化合物2‑AP，具有检测方法简单、易操作、样品与试剂消耗量少和结果准确可靠的特点，尤其适合于通过测定2‑AP含量进行大豆育种前的大批量品种筛选，对提高大豆选育时香味鉴评结果的准确性和可靠性，为大豆香味鉴评结果由“语言描述主观型”向“数值定量型”转变提供了技术基础，对深入挖掘大豆的香味资源具有重要的意义。并利用该方法在国外品种、国内地方和育成品种及遗传群体材料中进行了应用。

技术领域

本发明涉及有机物检测技术领域及方法应用，尤其涉及一种利用GC-MS法快速分析大豆香气特征化合物2-乙酰基-1吡咯啉含量的方法及应用。

背景技术

大豆起源于我国，是重要的植物蛋白和油脂来源，具有很高的营养价值和药用价值，被人们誉为“21世纪的健康食品”。我国生产的大豆主要用于食用，长期以来只重视产量和一般品质，忽略了香味品质。然而香味是大豆重要的品质指标之一，它不仅可以提高人的食欲，也具有重要的商品价值，因此，研究大豆香味不仅对培育优质大豆、改善豆制品风味具有重要的理论意义，对提高人们的幸福感具有重要的现实意义。研究发现，大豆的香气均源于2-乙酰基-1-吡咯啉(2AP)，有爆米花味。但是由于大豆中2-AP的化学性质不稳定且含量极低，使得2AP定量检测的难度增加。

目前，现有技术中检测大豆中2AP的方法有：以大豆鼓粒期种子(主茎上部第四节上叶片充分展开时)为材料，利用自动顶空气相色谱法(HS-GC)通过内标物质2,4-二甲基吡啶(DMP)测定大豆2AP浓度；利用同位素内标物法测定2AP浓度。这些方法操作繁琐，所用仪器昂贵，且每次分析都必须添加内标物或外标物，使用成本相对较高且操作复杂。且有关将测定2AP在育种中的应用较少。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供一种利用GC-MS法快速分析大豆香气特征化合物2-乙酰基-1吡咯啉含量的方法及应用。本发明利用GC-MS法快速测定大豆中2-AP，具有检测方法简单、易操作、样品与试剂消耗量少和结果准确可靠的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种利用GC-MS法快速分析大豆香气特征化合物2-乙酰基-1吡咯啉含量的方法，包括以下步骤：

(1)将大豆豆粉或开花期叶片、乙醇和无水硫酸钠混合后进行超声萃取，将所得萃取液与NaCl混合后进行离心分离，将所得上清液用0.22μm滤膜过滤，得到待测溶液，对所述待测溶液进行GC-MS检测，得到GC-MS检测结果，所述GC-MS检测结果包括2-乙酰基-1-吡咯啉的出峰时间以及峰面积；

(2)根据所述步骤(1)得到的峰面积以及预定的标准曲线，得到待测溶液中2-乙酰基-1-吡咯啉的浓度；所述标准曲线以2-乙酰基-1-吡咯啉标准溶液的浓度为横坐标、以2-乙酰基-1-吡咯啉标准溶液进行GC-MS检测的峰面积为纵坐标；

所述步骤(1)和(2)中GC-MS检测条件独立地包括:

色谱条件：色谱柱为安捷龙DB-WAX毛细管柱：30m×0.25mm×0.25μm，柱温升温程序为60℃保持2min，10℃/min升至100℃，然后以30℃/min升至230℃，保持5min；恒线速度41.2cm/s，进样口温度为250℃；载气为高纯氦气；不分流进样，进样量为1μL；

质谱条件:电子轰击离子源，离子源温度为200℃；离子化能量为70eV；接口温度为220℃；全扫描方式，扫描范围为m/z 35～500。

优选地，所述步骤(1)中大豆豆粉或开花期叶片、乙醇和无水硫酸钠的用量范围为(0.4～0.8g)：(1.5～3mL)：(0.1～0.2g)。

优选地，所述步骤(1)中超声萃取的时间为20～30min。